5.超离心法超离心法是最准确可靠的确定蛋白质分子量方法。(Svedberg于1940年设计)单位(厘米)离心场的沉降速度称沉降系数,用S表示沉降系数单位:1S=10-13秒HO>分子量不同的蛋白质,分子量越大,沉降系数越大分子量相同的蛋白质,密度越大,沉降系数越大,此方法昂贵和耗时,用的很少!
5. 超离心法 单位(厘米)离心场的沉降 速度称沉降系数,用S表示。 沉降系数单位:1S=10-13秒 Ø 分子量不同的蛋白质,分 子量越大,沉降系数越大; Ø 分子量相同的蛋白质,密 度越大,沉降系数越大。 此方法昂贵和耗时,用的很少! 超离心法是最准确可靠的确 定 蛋 白 质 分 子 量 方 法 。 (Svedberg 于1940年设计)
阿奇霉素片0.25g6片/盒为什么阿奇霉素可治疗支原体肺炎而头孢不可以?可逆性结合细菌50S核糖体亚基,抑制蛋白质合成哺乳动物无50S核糖体,故对人无明显作用主要为抑菌,高浓度可杀菌
为什么阿奇霉素可 治疗支原体肺炎, 而头孢不可以? •可逆性结合细菌50S核糖体亚基,抑制 蛋白质合成 •哺乳动物无50S核糖体,故对人无明显 作用 •主要为抑菌,高浓度可杀菌
蛋白质分子量(M)与沉降系数(S)的关系RTsM=D (1 - Vp)R气体常数(8.314×107ergs·mol-1·度-1)T-绝对温度D一扩散常数(蛋白质分子量很大,离心机转速很快,则忽略不计)V蛋白质的微分比容(m3.g-1)溶剂密度(20℃,g·ml-1)P沉降系数S
蛋白质分子量(M)与沉降系数(s)的关系 M = —————— RTs D(1-Vρ) R——气体常数(8.314×107ergs·mol -1 ·度-1) T——绝对温度 D——扩散常数(蛋白质分子量很大,离心机转速很 快,则忽略不计) V——蛋白质的微分比容(m3·g-1) ρ——溶剂密度(20℃,g·ml-1) s——沉降系数
COO-蛋白质分子量0H.N-C-H(二)蛋白质的紫外吸收R(三)两性解离与等电点(四)胶体性质(五)蛋白质的变性和复性β,一(六)蛋白质的沉淀(七)显色反应
(一)蛋白质分子量 (二)蛋白质的紫外吸收 (三)两性解离与等电点 (四)胶体性质 (五)蛋白质的变性和复性 (六)蛋白质的沉淀 (七)显色反应
蛋白质的紫外吸收(二)定性和定量5-色氨酸吸收紫外线:4>一是所含肽键结3构对220nm以下紫吸光度外线有强吸收;2酪氨酸>二是所含色氨酸1和酪氨酸对280nm苯丙氨酸0240260280紫外线有强吸收。波长(nm)在一定条件下,蛋白质稀溶液对280nm紫外线的吸光度(A280)与浓度成正比,实际应用中常根据这一特征进行蛋白质定量分析
(二)蛋白质的紫外吸收 吸收紫外线: Ø一是所含肽键结 构对220nm以下紫 外线有强吸收; Ø二是所含色氨酸 和酪氨酸对280nm 紫外线有强吸收。 在一定条件下,蛋白质稀溶液对280nm紫外线的吸光度(A280 ) 与浓度成正比,实际应用中常根据这一特征进行蛋白质定量分析。 定性和定量