实验五 碱性磷酸酶米氏常 数的测定
实验五 碱性磷酸酶米氏常 数的测定
一、目的要求 1.学习分光光度法测定的原理和方法 2.学习和掌握米氏常数（Km）及最大反应速度 （Vm）的测定原理和方法，测出碱性磷酸酶 在以对硝基苯酚磷酸为底物时的Km 和Vm值
一、目的要求 1.学习分光光度法测定的原理和方法 2.学习和掌握米氏常数（Km）及最大反应速度 （Vm）的测定原理和方法，测出碱性磷酸酶 在以对硝基苯酚磷酸为底物时的Km 和Vm值
二、原理 一、分光光度法的基本原理及方法 （一）利用吸收光谱对物质进行定性分析 1．原理
二、原理 一、分光光度法的基本原理及方法 （一）利用吸收光谱对物质进行定性分析 1．原理
2．主要方法： （1）比较吸收光谱曲线 （2）比较最大吸收波长 蛋白质的最大吸收波长为280nm，核酸的最大吸收波长 为260nm。 1.苯丙氨酸 2.酪氨酸 3.色氨酸
2．主要方法： （1）比较吸收光谱曲线 （2）比较最大吸收波长 蛋白质的最大吸收波长为280nm，核酸的最大吸收波长 为260nm。 1.苯丙氨酸 2.酪氨酸 3.色氨酸
（3）比较吸光度的比值 纯DNA 1.8 280 260 = nm nm A A
（3）比较吸光度的比值 纯DNA 1.8 280 260 = nm nm A A