实验八 SDS－聚丙烯酰胺凝胶 垂直板电泳分离蛋白质
实验八 SDS－聚丙烯酰胺凝胶 垂直板电泳分离蛋白质
一、目的要求 1.学习电泳原理和技术 2.学习和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电 泳分离蛋白质技术
一、目的要求 1.学习电泳原理和技术 2.学习和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电 泳分离蛋白质技术
二、原理 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide， 简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(N，N— methylene-bisacylamide，简称Bis)在加速剂N， N ，N ， N—四 甲 基 乙 二胺 (N， N ，N ，N— tetramethyl ethylenedia mine，简称TEMED)和催 化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4 )2S2O8， 简 称 AP) 或 核 黄 素 (ribofavin 即 vita min B2 ， C17H20O6N4 )的作用下聚合交联成三维网状结构的凝 胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶 电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称 PAGE)
二、原理 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide， 简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(N，N— methylene-bisacylamide，简称Bis)在加速剂N， N ，N ， N—四 甲 基 乙 二胺 (N， N ，N ，N— tetramethyl ethylenedia mine，简称TEMED)和催 化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4 )2S2O8， 简 称 AP) 或 核 黄 素 (ribofavin 即 vita min B2 ， C17H20O6N4 )的作用下聚合交联成三维网状结构的凝 胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶 电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称 PAGE)
聚丙烯酰胺凝胶有下列特性： (1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好； (2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不 溶； (3)对pH和温度变化较稳定； (4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致， 则样品分离重复性好； (5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g (6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度， 通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径； (7)分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电 荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有 更高的分辨率
聚丙烯酰胺凝胶有下列特性： (1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好； (2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不 溶； (3)对pH和温度变化较稳定； (4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致， 则样品分离重复性好； (5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g (6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度， 通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径； (7)分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电 荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有 更高的分辨率
凝胶浓度(T)的选择与被分离物质分子量密切相关。 表3.4 分子量范围与凝胶浓度的关系 分子量范围 适用的凝胶浓度/(%) 蛋 白 质 104 20-30 1-4×104 15-20 1-5×104-1×105 10-15 1×105 5-10 5×105 2-5 核酸(RNA) 104 15–20 104–105 5-10 105-2×106 2-2.6
凝胶浓度(T)的选择与被分离物质分子量密切相关。 表3.4 分子量范围与凝胶浓度的关系 分子量范围 适用的凝胶浓度/(%) 蛋 白 质 104 20-30 1-4×104 15-20 1-5×104-1×105 10-15 1×105 5-10 5×105 2-5 核酸(RNA) 104 15–20 104–105 5-10 105-2×106 2-2.6