实验六 细胞色素C（Cytc）的 制备
实验六 细胞色素C（Cytc）的 制备
一、目的要求 1.学习蛋白质制备的基本原理及方法。 2.学习和掌握制备细胞色素C的方法
一、目的要求 1.学习蛋白质制备的基本原理及方法。 2.学习和掌握制备细胞色素C的方法
二、原理 细胞色素C存在于线粒体中，是唯一较容易从线粒体 中提前出来的蛋白质。先向心肌中加入低浓度三氯乙 酸溶液（TCA），一起匀浆，由于细胞色素C是碱性 蛋白，低浓度的TCA可使其酸化，易于从膜上溶解下 来，而其它的大部分蛋白质都被TCA沉淀下来。再通 过硫酸铵沉淀肌红蛋白，最后用较高浓度的TCA使细 胞色素C沉淀出来，达到初步纯化的目的
二、原理 细胞色素C存在于线粒体中，是唯一较容易从线粒体 中提前出来的蛋白质。先向心肌中加入低浓度三氯乙 酸溶液（TCA），一起匀浆，由于细胞色素C是碱性 蛋白，低浓度的TCA可使其酸化，易于从膜上溶解下 来，而其它的大部分蛋白质都被TCA沉淀下来。再通 过硫酸铵沉淀肌红蛋白，最后用较高浓度的TCA使细 胞色素C沉淀出来，达到初步纯化的目的
三、材料、试剂与器材 材料：猪心 试剂： 20% TCA、 0.145 mol/L TCA、硫酸铵、10% NaOH 器材：组织捣碎机 、离心机、磁力搅拌器
三、材料、试剂与器材 材料：猪心 试剂： 20% TCA、 0.145 mol/L TCA、硫酸铵、10% NaOH 器材：组织捣碎机 、离心机、磁力搅拌器
四、离心机的使用 (1).离心机要置水平位置,以保证旋转轴垂直地球水平面。 (2).使用前应检查套环是否平衡。 (3).离心杯及其外套(离心管套)是否平衡。 (4).样品倾入离心杯后应与离心管套一起两两平衡，平 衡后把它们放置于转子的对称位置。 (5).盖好盖子,打开电源开关,调整离心时间。 (6).启动离心时转速应由小至大,缓慢升速(一般要 2~3min)。 (7).达到预定转速后再调整离心时间至预定时间。 (8).离心完成后要调整调速连杆至零位,同时关上电源。 (9).要等到转速为零时才能打开离心机盖,取出样品
四、离心机的使用 (1).离心机要置水平位置,以保证旋转轴垂直地球水平面。 (2).使用前应检查套环是否平衡。 (3).离心杯及其外套(离心管套)是否平衡。 (4).样品倾入离心杯后应与离心管套一起两两平衡，平 衡后把它们放置于转子的对称位置。 (5).盖好盖子,打开电源开关,调整离心时间。 (6).启动离心时转速应由小至大,缓慢升速(一般要 2~3min)。 (7).达到预定转速后再调整离心时间至预定时间。 (8).离心完成后要调整调速连杆至零位,同时关上电源。 (9).要等到转速为零时才能打开离心机盖,取出样品