厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验十 DNA 片段从凝胶中回收

实验十 ＤＮＡ片段从琼脂糖凝胶 中的分离 DNA fragment recovery from the agrose gel

实验十 ＤＮＡ片段从琼脂糖凝胶 中的分离 DNA fragment recovery from the agrose gel

一．实验目的及背景  在生物技术实验中，ＰＣＲ反应获得的目的 片段，酶切后所得特定的ＤＮＡ序列， 分子 杂交中所制备的探针等，经过琼脂糖凝胶电 泳后，目的片段与其它ＤＮＡ分开， 这就需 要有一套方法将目的ＤＮＡ从凝胶中分离出 来，通过处理后得到纯化的目的ＤＮＡ， 以 用于以后分子杂交，重组子构建，序列分析 等

一．实验目的及背景  在生物技术实验中，ＰＣＲ反应获得的目的 片段，酶切后所得特定的ＤＮＡ序列， 分子 杂交中所制备的探针等，经过琼脂糖凝胶电 泳后，目的片段与其它ＤＮＡ分开， 这就需 要有一套方法将目的ＤＮＡ从凝胶中分离出 来，通过处理后得到纯化的目的ＤＮＡ， 以 用于以后分子杂交，重组子构建，序列分析 等

从凝胶中分离回收ＤＮＡ的方法 现在常用的技术有：  电洗脱法  低熔点琼脂糖凝胶法  ＤＥＡＥ滤膜插片法等  其中电洗脱法，经济节省，操作方便， 对Ｄ ＮＡ的回收效果好

从凝胶中分离回收ＤＮＡ的方法 现在常用的技术有：  电洗脱法  低熔点琼脂糖凝胶法  ＤＥＡＥ滤膜插片法等  其中电洗脱法，经济节省，操作方便， 对Ｄ ＮＡ的回收效果好

低熔点琼脂糖凝胶法  65oC琼脂糖凝胶熔点  低熔点琼脂糖凝胶 37oC 液体

低熔点琼脂糖凝胶法  65oC琼脂糖凝胶熔点  低熔点琼脂糖凝胶 37oC 液体

ＤＥＡＥ滤膜插片法  High efficient  DNA high quality for microinjection  <5kb fragment  100ng DNA fragment  10mmol/L EDTA(pH8.0) 5 minutes  0.5 mol/L NaOH 5 minutes  低盐缓冲液50mM/LTris .Cl 0.15M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0)  高盐缓冲液50mM/LTris .Cl 1M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0)

ＤＥＡＥ滤膜插片法  High efficient  DNA high quality for microinjection  <5kb fragment  100ng DNA fragment  10mmol/L EDTA(pH8.0) 5 minutes  0.5 mol/L NaOH 5 minutes  低盐缓冲液50mM/LTris .Cl 0.15M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0)  高盐缓冲液50mM/LTris .Cl 1M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0)