实验九 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦 电泳测定蛋白质的等电点
实验九 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦 电泳测定蛋白质的等电点
一、目的要求 1.学习和掌握圆盘电泳技术 2.学习和掌握等电聚焦电泳测定蛋白质的等 电点方法
一、目的要求 1.学习和掌握圆盘电泳技术 2.学习和掌握等电聚焦电泳测定蛋白质的等 电点方法
二、原理 聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(Isoelectric Focusing-PAGE，简称IEF-PAGE)：利用各种蛋白质 pI不同，以聚丙烯酰胺凝胶为电泳支持物，并在其 中加入两性电解质载体(carrier ampholytes)，两 性电解质载体在电场作用下，按各自pI形成从阳极 到阴极逐渐增加的平滑和连续的pH梯度。在电场作 用下，蛋白质在此pH梯度凝胶中泳动，当迁移至pH 值等于pI处时，就不再泳动，而被浓缩成狭窄的区 带
二、原理 聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(Isoelectric Focusing-PAGE，简称IEF-PAGE)：利用各种蛋白质 pI不同，以聚丙烯酰胺凝胶为电泳支持物，并在其 中加入两性电解质载体(carrier ampholytes)，两 性电解质载体在电场作用下，按各自pI形成从阳极 到阴极逐渐增加的平滑和连续的pH梯度。在电场作 用下，蛋白质在此pH梯度凝胶中泳动，当迁移至pH 值等于pI处时，就不再泳动，而被浓缩成狭窄的区 带
两性电解质载体(carrier ampholytes) (1)易溶于水，在pI处应有足够的缓冲能力，形成稳 定的pH梯度，不致被蛋白质或其它两性电解质改变 pH梯度。 (2)在pI处应有良好的电导及相同的电导系数，以保 持均匀的电场。 (3)分子量小，可通过透析或分子筛法除去，便于与 生物大分子分开。 (4)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，也无 变性作用，其化学组成不同于蛋白质
两性电解质载体(carrier ampholytes) (1)易溶于水，在pI处应有足够的缓冲能力，形成稳 定的pH梯度，不致被蛋白质或其它两性电解质改变 pH梯度。 (2)在pI处应有良好的电导及相同的电导系数，以保 持均匀的电场。 (3)分子量小，可通过透析或分子筛法除去，便于与 生物大分子分开。 (4)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，也无 变性作用，其化学组成不同于蛋白质
IEF-PAGE分离蛋白质并测定pI
IEF-PAGE分离蛋白质并测定pI