■带电状态判定 pl-pH<0 带负电 pl-pH>O ■■■■■■■■■■■■■■■■ 带正电 pl-pH=0 不带电 ■等电点计算 ①侧链为非极性基团或虽为极性基团但不解离的氨 基酸:p=%(pK1+pK2) ②酸性氨基酸(Gu、Asp)及cys:p=%么(pK1+pK) ③碱性氨基酸(赖、精、组):pl=‰(pK2+pKg)
刘新文，蛋白质化学 n等电点计算 ①侧链为非极性基团或虽为极性基团但不解离的氨 基酸：pI=½(pK1+pK2 ) ②酸性氨基酸(Glu、Asp)及Cys：pI=½(pK1+pKR) ③碱性氨基酸(赖、精、组)：pI=½(pK2+pKR) n带电状态判定 pI-pH<0 …………….带负电 pI-pH>0 …………….带正电 pI-pH＝0 …………….不带电
色氨酸 3、紫外吸收: 光 rp、Tyr和 Phe在280nm波 长附近具有最大 吸收峰,其中 Trp的最大吸收 略氨 最接近280nm 苯丙氨酸 0240250260270280290300310 波长(nm)
刘新文，蛋白质化学 3、紫外吸收： nTrp、Tyr和 Phe在280nm波 长附近具有最大 吸收峰，其中 Trp的最大吸收 最接近280nm
4、显色反应: ■茚三酮反应 R H HN-C--COOH+ 0|Ccio -RCHO+NH+ COh OH 氨基酸 茚三酮水合物 还原茚三酮 c h H 2H20 + Nh3 OH 0 0 还原茚三酮 茚三酮 蓝紫色化合物
刘新文，蛋白质化学 4、显色反应： n茚三酮反应
4、显色反应: ■茚三酮反应 氨基酸与茚三酮水合物共热,可生成 蓝紫色化合物,其最大吸收峰在570nm 处。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在 正比关系,因此可作为氨基酸定量分析方 法。例外:Pro黄色;An棕色 ■其他反应:荧光胺反应、侧链特异基团反应
刘新文，蛋白质化学 4、显色反应： n茚三酮反应 n其他反应：荧光胺反应、侧链特异基团反应 例外：Pro黄色；Asn棕色
5、成肽反应: Nh -CH-C+ NH-CH-C H OH HiH OH 甘氨酸 甘氨酸 HOH NH2-CH+C N+CH-C H/ H:H OH 甘氨酰甘氨酸 肽键
刘新文，蛋白质化学 5、成肽反应：