一、PCR检测 4.步骤 1)引物设计及合成 引物：PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互 补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA 序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物， 利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增
一、PCR检测 4. 步骤 1）引物设计及合成 引物：PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互 补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA 序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物， 利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增
1)引物设计及合成 ①引物长度：15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可 扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩 增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC 最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的 成串排列
1）引物设计及合成 ①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可 扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩 增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC 最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的 成串排列
1)引物设计及合成 ④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互 补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体， 产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基， 特别是最末及倒数第二个碱 基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而 导致PCR失败
1）引物设计及合成 ④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互 补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体， 产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3 ’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱 基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而 导致PCR失败
1)引物设计及合成 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶 序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子 克隆很有好处 ⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它 序列无明显同源性
1）引物设计及合成 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶 序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子 克隆很有好处。 ⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它 序列无明显同源性
4.步骤 2)模板DNA的制备 √提取植物基因组DNA或总DNA; √制备方法可用小量提取法或大量提取法； √检测时要有阳性和阴性对照，阳性对照可用质 粒DNA,阴性对照可从未转基因的植株中提取
4. 步骤 2）模板DNA的制备 提取植物基因组DNA或总DNA； 制备方法可用小量提取法或大量提取法； 检测时要有阳性和阴性对照，阳性对照可用质 粒DNA，阴性对照可从未转基因的植株中提取