《生物技术制药》实验指导 (供生物技术专业使用) 杨德龙栗孟飞李唯编写 甘肃农业大学 生命科学技术学院生物制品系 2008年1月
《生物技术制药》实验指导 （供生物技术专业使用） 杨德龙 栗孟飞 李 唯 编写 甘肃农业大学 生命科学技术学院生物制品系 2008 年 1 月
学生实验守则 1.学生实验前必须认真预习，包括到实验室进行预习，并写好预习报告（含讲义指定 课前必做的内容及实验数据表格)。进入实验室须带上预习报告，经教师检查同意方可 进行实验。 2.严格按照实验分组表进行实验，不得擅自调整分组。遵守上课时间，不得无故迟到、 缺席。有事有病要事先向实验教师请假。一般情况下，所缺实验不得补做。 3.实验前检查、清理好所需的仪器、用具。如有缺损，应立即向教师报告，不得自己 任意拉用。 4.遵守课堂纪律，保持安静整洁的实验环境。严禁吃东西、随地吐痰、乱扔脏物、大 声喧哗等不文明行为。 5.使用电源时，严禁带电接线或拆线，务必经过教师检查线路后才能接通电源；实验 后要切断电源。 6.爱护仪器，严格按仪器说明书或操作规程操作。仪器用具发生故障、损坏或丢失等 特别情况，应立即向教师报告。严禁擅自拆卸、搬弄仪器。有损坏仪器，应做出书面检 查，等候处理。公用工具用完后应立即归还原处。 7.实验中要注意安全，如仪器设备出现异常气味、打火、冒烟、发热、响声、振动等 现象，应立即切断电源，关闭仪器，并向教师报告。 8.实验中若发生触电等人身伤害，应保持镇定并立即切断电源，马上向教师报告，以 便采取相应措施。 9.实验中要注意节约使用实验材料。 10.作完实验，学生应负责将仪器整理还原，桌面、凳子收拾整齐，经教师审查测量数 据和仪器还原情况并同意后，方可离开实验室。 11.实验室中任何仪器用具不得带出实验室。 12.每次实验后，由值日学生打扫卫生并协助教师收整仪器。 13.实验报告应在实验教师规定时间内交实验室。 2008年1月
学生实验守则 1．学生实验前必须认真预习，包括到实验室进行预习，并写好预习报告（含讲义指定 课前必做的内容及实验数据表格）。进入实验室须带上预习报告，经教师检查同意方可 进行实验。 2．严格按照实验分组表进行实验，不得擅自调整分组。遵守上课时间，不得无故迟到、 缺席。有事有病要事先向实验教师请假。一般情况下，所缺实验不得补做。 3．实验前检查、清理好所需的仪器、用具。如有缺损，应立即向教师报告，不得自己 任意拉用。 4．遵守课堂纪律，保持安静整洁的实验环境。严禁吃东西、随地吐痰、乱扔脏物、大 声喧哗等不文明行为。 5．使用电源时，严禁带电接线或拆线，务必经过教师检查线路后才能接通电源；实验 后要切断电源。 6．爱护仪器，严格按仪器说明书或操作规程操作。仪器用具发生故障、损坏或丢失等 特别情况，应立即向教师报告。严禁擅自拆卸、搬弄仪器。有损坏仪器，应做出书面检 查，等候处理。公用工具用完后应立即归还原处。 7．实验中要注意安全，如仪器设备出现异常气味、打火、冒烟、发热、响声、振动等 现象，应立即切断电源，关闭仪器，并向教师报告。 8．实验中若发生触电等人身伤害，应保持镇定并立即切断电源，马上向教师报告，以 便采取相应措施。 9．实验中要注意节约使用实验材料。 10．作完实验，学生应负责将仪器整理还原，桌面、凳子收拾整齐，经教师审查测量数 据和仪器还原情况并同意后，方可离开实验室。 11．实验室中任何仪器用具不得带出实验室。 12．每次实验后，由值日学生打扫卫生并协助教师收整仪器。 13．实验报告应在实验教师规定时间内交实验室。 2008 年 1 月
《生物技术制药》实验考核办法 考核内容包括实验预习、实验操作、实验设计、实验考试。要求学生每一步操作 都要规范、严谨，原始数据翔实可靠，数据敔处理实事求是，结果分析清晰可信。实验 结束后，进行讨论与总结，撰写实验报告，加深学生对原理的理解和掌握。准确、科 学地考核学生的知识、技术和能力，对综合素质提高起到导向作用。 学生本门实验课的最终成绩为平时成绩与实验设计成绩之和。考核采取多元评价 方式，考核内容主要有：平时成绩考核实验技能、实验态度、实验室常识等的掌握和 实验报告等方面；实验设计成绩考核学生的独立实验设计和实践过程，注重学生的创 新性思维及独立分析问题、解决问题能力等。 成绩 考核项目 分值 考核内容 考核方法 考察学生在实验过程中的 无故迟到一次扣3分 出勤情况、对实验课的重视无故旷课一次扣10 实验态度 10% 程度、预习情况、对实验室分。 仪器设备的爱护以及与其 他同学的合作情况等 考察学生实验操作技术的 教师根据对学生操作 实验技能的 30% 规范程度，仪器设备使用情的观察对不规范的操 掌握 况 作采取扣分制 平时 应取得了预期的实验 成绩 结果。如某个实验单 (80%) 考察学生每个实验步骤是 元失败而未能获得相 实验结果 20% 否取得了预期的结果 应的中间生物材料， 向实验教师索取相应 的材料，扣2分 教师根据学生上交的 考察原始数据是否翔实可 实验报告的规范性， 实验报告 20% 靠，数据是否处理实事求 分析及讨论的合理性 是，结果分析是否清晰可信 等进行打分
《生物技术制药》实验考核办法 考核内容包括实验预习、实验操作、实验设计、实验考试。要求学生每一步操作 都要规范、严谨，原始数据翔实可靠，数据处理实事求是，结果分析清晰可信。实验 结束后，进行讨论与总结，撰写实验报告，加深学生对原理的理解和掌握。准确、科 学地考核学生的知识、技术和能力，对综合素质提高起到导向作用。 学生本门实验课的最终成绩为平时成绩与实验设计成绩之和。考核采取多元评价 方式，考核内容主要有：平时成绩考核实验技能、实验态度、实验室常识等的掌握和 实验报告等方面；实验设计成绩考核学生的独立实验设计和实践过程，注重学生的创 新性思维及独立分析问题、解决问题能力等。 成绩 考核项目 分值 考核内容 考核方法 平时 成绩 （80%） 实验态度 10％ 考察学生在实验过程中的 出勤情况、对实验课的重视 程度、预习情况、对实验室 仪器设备的爱护以及与其 他同学的合作情况等 无故迟到一次扣 3 分； 无故旷课一次扣 10 分。 实验技能的 掌握 30％ 考察学生实验操作技术的 规范程度，仪器设备使用情 况 教师根据对学生操作 的观察对不规范的操 作采取扣分制 实验结果 20% 考察学生每个实验步骤是 否取得了预期的结果 应取得了预期的实验 结果。如某个实验单 元失败而未能获得相 应的中间生物材料， 向实验教师索取相应 的材料，扣 2 分 实验报告 20％ 考察原始数据是否翔实可 靠，数据是否处理实事求 是，结果分析是否清晰可信 教师根据学生上交的 实验报告的规范性， 分析及讨论的合理性 等进行打分
《生物技术制药》实验指导 教师根据设计的实验 设计方案和 考察学生自主设计的实验 10% 方案新颖，研究方案 实验 设计报告 的合理性和可行性 可行打分 设计 考察学生在实施过程中出 成绩 教师根据实验实施情 实验结果和 现问题时的分析解决能力、 (20%) 10% 况、实验数据和结果 分析报告 是否能达到预期结果、结果 打分 的分析是否合理 目 录 实验一细菌感受态的制备和质粒的转化 .2 实验二碱变性法提取质粒DNA 6 实验三水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 11 实验四DNA的限制性内切酶酶切 15 实验五DNA的回收与连接 18 实验六基因的PCR扩增 23 实验七用温度敏感型启动子表达系统表达目的基因 29 实验八基因组合生物合成新化合物 36 实验九药用甘草片中甘草酸含量的分析及其质量评价 47 实验十牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备.… 48 实验十一固定化细胞法生产L天冬氨酸和L丙氨酸 50 实验十二重组水蛭素Ⅲ的制备 57 实验十三酸醇提取法制备猪胰岛素 65 实验十四多肽缩宫素的Fmoc固相合成法 70
《生物技术制药》实验指导 1 实验 设计 成绩 （20%） 设计方案和 设计报告 10％ 考察学生自主设计的实验 的合理性和可行性 教师根据设计的实验 方案新颖，研究方案 可行打分 实验结果和 分析报告 10％ 考察学生在实施过程中出 现问题时的分析解决能力、 是否能达到预期结果、结果 的分析是否合理 教师根据实验实施情 况、实验数据和结果 打分 目 录 实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化....................................................................... 2 实验二 碱变性法提取质粒 DNA ..................................................................................... 6 实验三 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA ............................................................... 11 实验四 DNA 的限制性内切酶酶切 ............................................................................... 15 实验五 DNA 的回收与连接 ........................................................................................... 18 实验六 基因的 PCR 扩增............................................................................................... 23 实验七 用温度敏感型启动子表达系统表达目的基因................................................. 29 实验八 基因组合生物合成新化合物............................................................................. 36 实验九 药用甘草片中甘草酸含量的分析及其质量评价............................................... 47 实验十 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备............................................................... 48 实验十一 固定化细胞法生产 L-天冬氨酸和 L-丙氨酸.................................................. 50 实验十二 重组水蛭素Ⅲ的制备....................................................................................... 57 实验十三 酸醇提取法制备猪胰岛素............................................................................... 65 实验十四 多肽缩宫素的 Fmoc 固相合成法.................................................................... 70
《生物技术制药》实验指导 实验十五酵母RNA的制备和单核苷酸的离子交换柱层析分析….76 实验十六单核苷酸衍生物制备.… 82 实验十七胰弹性蛋白酶的制备及活力测定 85 实验十八超氧化物歧化酶的分离纯化 89 实验十九重组门冬酰胺酶Ⅱ的纯化与分析 97 实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化 【实验目的】 通过实验学会感受态细胞的制备方法和DNA转化的最基本操作，以及如何提高 转化效率的思路。本实验综合因素较多，难度较大，是分子生物学中的一个很关键的 实验手段。 【实验原理】 转化是指某一细胞系由于接受了外源DNA,而导致其原来的遗传性状发生改变， 这种遗传性状包括遗传型和表型的改变
《生物技术制药》实验指导 2 实验十五 酵母 RNA 的制备和单核苷酸的离子交换柱层析分析................................. 76 实验十六 单核苷酸衍生物制备....................................................................................... 82 实验十七 胰弹性蛋白酶的制备及活力测定................................................................... 85 实验十八 超氧化物歧化酶的分离纯化........................................................................... 89 实验十九 重组门冬酰胺酶Ⅱ的纯化与分析................................................................... 97 实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化 【实验目的】 通过实验学会感受态细胞的制备方法和 DNA 转化的最基本操作，以及如何提高 转化效率的思路。本实验综合因素较多，难度较大，是分子生物学中的一个很关键的 实验手段。 【实验原理】 转化是指某一细胞系由于接受了外源 DNA，而导致其原来的遗传性状发生改变， 这种遗传性状包括遗传型和表型的改变