3.构建分泌型克隆表达载体11S 优点:1S（1)易分离提纯S(2)避免被宿主酶所降解S（(3)避免对宿主细胞产生毒害;S（4)避免产生包函体：11S(5)无需裂解细胞。11111
3. 构建分泌型克隆表达载体 § 优点： § (1)易分离提纯； § (2)避免被宿主酶所降解； § (3)避免对宿主细胞产生毒害； § (4)避免产生包函体； § (5)无需裂解细胞
HindIIIEcoRIBamHISSipp脂蛋白基因PlacPipp-Sal IpIN-III-ompAi7.4kblaclamp--ori分泌型克隆表达载体
111四.包涵体1111包涵体（inclusionbody)：在原核细胞（尤其是E.co1i)中表达外源基因时表达蛋白常在细胞质内凝聚，形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒11111(1)有利于防止蛋白酶水解表达蛋白；/11(2)有利于分离纯化：111(3)包含体不具有生物活性，只有当溶解包含体并使表达蛋白复性后才能灰复活性。(4)表达蛋白的第一个Met将不被切除，这将影响蛋白质的性质。1111I111R索11111111111111111
四.包涵体 § 包涵体(inclusion body)：在原核细胞(尤其是 E.coli)中表达外源基因时表达蛋白常在细胞质内凝聚， 形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒。 (1)有利于防止蛋白酶水解表达蛋白； (2)有利于分离纯化； (3)包含体不具有生物活性，只有当溶解包含体并使表达蛋白 复性后才能灰复活性。 (4)表达蛋白的第一个Met将不被切除，这将影响蛋白质的性 质
义S包涵体内的蛋白是非折叠状态的聚集体，不具R宗有生物学活性511E111EO形成原因：包涵体形成与胞质内蛋白质生成速率有关，新生多肽浓度高，无充足的时间进行折叠，从而形成非结晶、无定形的蛋白质的聚集体；1包涵体的形成还被认为与宿主菌的培养条件，81如培养基成分、I温度、pH值、离子强度等因素福有关。11111
§ 包涵体内的蛋白是非折叠状态的聚集体，不具 有生物学活性。 § 形成原因： § 包涵体形成与胞质内蛋白质生成速率有关，新 生多肽浓度高，无充足的时间进行折叠，从而 形成非结晶、无定形的蛋白质的聚集体； § 包涵体的形成还被认为与宿主菌的培养条件， 如培养基成分、温度、pH值、离子强度等因素 有关
第三节外源基因在真核细胞肥中的表达福1S真核表达系统分三类：s(1)哺乳动物细胞S (2)昆虫细胞S(3)酵母S各有与之适应的表达载体和筛选策略S真核表达系统必须使用真核启动子拉
第三节 外源基因在真核细胞 中的表达 § 真核表达系统分三类： § (1)哺乳动物细胞 § (2)昆虫细胞 § (3)酵母 § 各有与之适应的表达载体和筛选策略。 § 真核表达系统必须使用真核启动子