蛋白质浓度测定：考马斯亮蓝法 和紫外吸收法 生化与分子生物学系 生命科学学院 四川农业大学
蛋白质浓度测定：考马斯亮蓝法 和紫外吸收法 生化与分子生物学系 生命科学学院 四川农业大学
目录 1.蛋白质含量测定的意义 2.测定方法、原理、优缺点 3.药品和器材 4.主要步骤 5.实验结果及数据处理 6.注意事项
目录 1. 蛋白质含量测定的意义 2. 测定方法、原理、优缺点 3. 药品和器材 4. 主要步骤 5. 实验结果及数据处理 6. 注意事项
蛋白质含量测定的意义 ·生物体重要的组成成分。 ·食品的重要营养指标。 ·产品开发、优化、控制和质检等方面
蛋白质含量测定的意义 • 生物体重要的组成成分。 • 食品的重要营养指标。 • 产品开发、优化、控制和质检等方面。 • ……
测定方法 蛋白质含量不仅可根据其物理性质：折射率、体积质量（比重）、紫外光吸收及 近红外法来测定；也可利用蛋白质的化学性质，用化学反应方法，如凯氏定氮法、 双缩脲法、福林(Foli)-酚试剂法测定，还可用染色法，如用氨基黑l0B、考马斯亮 蓝测定；还可用萤光激发、氯胺T、放射性同位素计数等灵敏度较高的方法测定。 上述方法中凯氏定氮法是测定蛋白质含量的经典方法，是蛋白质含量测定的国际 和国家标准测定方法；而紫外吸收法、双缩脲法、福林-酚试剂法、考马斯亮蓝染色 法是蛋白质含量测定的常用方法，它们操作简单快速，不需要昂贵的设备。 蛋白质测定方法各有优缺点，需要综合考虑样品纯度、干扰物质、灵敏度成本、 时间等要求而确定
测定方法 蛋白质含量不仅可根据其物理性质：折射率、体积质量（比重）、紫外光吸收及 近红外法来测定；也可利用蛋白质的化学性质，用化学反应方法，如凯氏定氮法、 双缩脲法、福林（Folin）-酚试剂法测定，还可用染色法，如用氨基黑10B、考马斯亮 蓝测定；还可用萤光激发、氯胺T、放射性同位素计数等灵敏度较高的方法测定。 上述方法中凯氏定氮法是测定蛋白质含量的经典方法，是蛋白质含量测定的国际 和国家标准测定方法；而紫外吸收法、双缩脲法、福林-酚试剂法、考马斯亮蓝染色 法是蛋白质含量测定的常用方法，它们操作简单快速，不需要昂贵的设备。 蛋白质测定方法各有优缺点，需要综合考虑样品纯度、干扰物质、灵敏度成本、 时间等要求而确定
凯氏定氮法 蛋白质是一类复杂的有机含氮化合物。其中每一种蛋白 质都有其恒定的含氮量，大约在14%~18%，平均为16%。 由凯氏定氮法测定出样品中的含氮量，再乘以系数6.25，即 得到样品蛋白质含量。含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中 的碳、氢等元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨， 并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。通常称此过程为“消化” 通常需要加入硫酸钾或疏酸钠以提高反应液的沸点，并加入 硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。 该法是蛋白质含量测定的国标法。 优点是准确度很高，可处理复杂样品；缺点是周期长， 不能区分N的来源（三聚氰胺事件）
蛋白质是一类复杂的有机含氮化合物。其中每一种蛋白 质都有其恒定的含氮量，大约在14%～18%，平均为16%。 由凯氏定氮法测定出样品中的含氮量，再乘以系数6.25，即 得到样品蛋白质含量。含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中 的碳、氢等元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨， 并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。通常称此过程为“消化” 。 通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入 硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。 该法是蛋白质含量测定的国标法。 优点是准确度很高，可处理复杂样品；缺点是周期长， 不能区分N的来源（三聚氰胺事件）。 凯氏定氮法