双缩脲法(BCA法) 双缩脲在碱性条件下能与Cu+结合生成紫红色络 合物（称双缩脲反应）。而蛋白质分子中含有两个以 NH 上相邻的肽键，其结构与双缩脲类似，因此也能发生 双缩脲反应，生成紫红色络合物，其反应后溶液颜色 的深浅与蛋白质（浓度）含量在一定范围内呈线性关 系，符合比尔定律，而且与蛋白质的相对分子质量及 H 氨基酸成分无关，受蛋白质特异性影响较小，故可利 用此反应通过比色法测定蛋白质的含量，该法测定蛋 白质浓度范围为1~10mgmL。 Ig(Io/D)=K2C I为入射光强度 双缩脲法优点是快速、硫酸铵不干扰此显色反应， 有利于对蛋白质纯化早期步骤蛋白质的测定。缺点是 I为透过光强度 灵敏度偏低。 K2为吸收系数，为常数 C为吸光物质的浓度
双缩脲法（BCA法） 双缩脲在碱性条件下能与Cu2+结合生成紫红色络 合物（称双缩脲反应）。而蛋白质分子中含有两个以 上相邻的肽键，其结构与双缩脲类似，因此也能发生 双缩脲反应，生成紫红色络合物，其反应后溶液颜色 的深浅与蛋白质（浓度）含量在一定范围内呈线性关 系，符合比尔定律，而且与蛋白质的相对分子质量及 氨基酸成分无关，受蛋白质特异性影响较小，故可利 用此反应通过比色法测定蛋白质的含量，该法测定蛋 白质浓度范围为1～10 mg/mL。 双缩脲法优点是快速、硫酸铵不干扰此显色反应， 有利于对蛋白质纯化早期步骤蛋白质的测定。缺点是 灵敏度偏低。 lg(I0 /I)=K2C I0为入射光强度； I为透过光强度； K2为吸收系数，为常数； C为吸光物质的浓度
考马斯亮蓝法(Bradford法) 考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中呈棕红色，可与蛋白质 O3S 的疏水微区结合，使蛋白质被“染色”呈现蓝色。在一定范围 内，溶液在595nm波长下的吸光值与蛋白质含量成正比， 符合比色法测定原理，因此可用于蛋白质的定量测定。 考马斯亮蓝染料该法试剂配制简单，操作简便快捷， 灵敏度比Folin-酚法还高4倍，测定范围1~1000ug,而且 干扰物质少，蛋白质间的变动也较小，是一种常用的蛋白 Coomassie brilliant blue G-250 质快速、灵敏测定方法。 缺点是SDS等去污剂干扰、蛋白氨基酸组成影响、考马 斯亮蓝污染的试管不易清洗
考马斯亮蓝法（Bradford法） Coomassie brilliant blue G-250 考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中呈棕红色，可与蛋白质 的疏水微区结合，使蛋白质被“染色”呈现蓝色。在一定范围 内，溶液在595 nm波长下的吸光值与蛋白质含量成正比， 符合比色法测定原理，因此可用于蛋白质的定量测定。 考马斯亮蓝染料该法试剂配制简单，操作简便快捷， 灵敏度比Folin-酚法还高4倍，测定范围1～1 000 μg，而且 干扰物质少，蛋白质间的变动也较小，是一种常用的蛋白 质快速、灵敏测定方法。 缺点是SDS等去污剂干扰、蛋白氨基酸组成影响、考马 斯亮蓝污染的试管不易清洗