第十五章细胞与疾病的诊断治疗第一节细胞诊断与细胞治疗一、细胞诊断细胞诊断（cytodiagnosis）是指通过观察细胞的结构和形态变化来研究和诊断疾病。其细胞标本可分为脱落细胞和活检（针吸）细胞两大类。细胞诊断方法简便易行、容易掌握，对设备要求不高、费用低、易推广，患者痛苦少或无痛苦，易于接受，已成为恶性肿瘤早期诊断的重要手段之一良性肿瘤细胞和肉瘤细胞不易脱落，脱落细胞学中的肿瘤细胞一般是指上皮性恶性肿瘤细胞，即癌细胞。单个癌细胞的形态特点主要表现在细胞核上，主要特征为：1核大，核大小不等。②核畸形、核膜增厚、核深染和核质比例失常。③细胞核染色质边移，出现巨大核仁，异常核分裂。④细胞体积增大，且大小不等。③梭形、蝌蚪形、星形等异常形态，可作为癌细胞的辅助诊断依据。二、细胞治疗细胞治疗（celltherapy）是指利用某些具有特定功能的细胞，采用生物工程方法获取或通过体外扩增、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞、促进组织器官再生和机体康复等治疗功效，从而达到治疗疾病的目的。广义的细胞治疗指向机体输入或去除细胞制剂，以增强或减弱机体的免疫应答，恢复机体的正常功能与状态，如使用各种细胞性血液成分、细胞疫苗、干细胞移植、免疫细胞治疗等。狭义的细胞治疗是取患者自身或无关供体的免疫细胞在体外经特异性抗原和细胞因子刺激，活化、增殖后再输回患者体内，使其发挥作用。细胞治疗根据细胞来源和类型可以分为体细胞治疗、干细胞治疗和肿瘤细胞颗粒抗原主动免疫治疗等。（一）体细胞治疗体细胞治疗又称为细胞（肿瘤）免疫疗法，是利用人体自身的部分免疫系统来攻击癌细胞，从而达到抑制甚至杀灭癌细胞的目的。目前常用的免疫治疗细胞包括：自体树突状细胞（DC细胞）疫苗，自然杀伤细胞（NK细胞），自体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）.自体树突状细胞（DC细胞）和刺激CIK细胞（DC-CIK细胞。该疗法通过采集人体自身免疫细胞，经由体外培养使其数量成千上万倍增多，然后再回输到人体以杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞。1.DC细胞治疗DC细胞是人体内抗原提呈能力最强的细胞。DC细胞治疗通过采271医学细胞--正文.indd-2712018-5-18 17:32:10
www.hep.com.cn 271 第十五章 细胞与疾病的诊断治疗 第一节 细胞诊断与细胞治疗 一、细胞诊断 细胞诊断（cytodiagnosis）是指通过观察细胞的结构和形态变化来研究和诊断疾病。 其细胞标本可分为脱落细胞和活检（针吸）细胞两大类。细胞诊断方法简便易行、容易 掌握，对设备要求不高、费用低、易推广，患者痛苦少或无痛苦，易于接受，已成为恶 性肿瘤早期诊断的重要手段之一。 良性肿瘤细胞和肉瘤细胞不易脱落，脱落细胞学中的肿瘤细胞一般是指上皮性恶性 肿瘤细胞，即癌细胞。单个癌细胞的形态特点主要表现在细胞核上，主要特征为：①核 大，核大小不等。②核畸形、核膜增厚、核深染和核质比例失常。③细胞核染色质边 移，出现巨大核仁，异常核分裂。④细胞体积增大，且大小不等。⑤梭形、蝌蚪形、星 形等异常形态，可作为癌细胞的辅助诊断依据。 二、细胞治疗 细胞治疗（cell therapy）是指利用某些具有特定功能的细胞，采用生物工程方法 获取或通过体外扩增、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和 肿瘤细胞、促进组织器官再生和机体康复等治疗功效，从而达到治疗疾病的目的。广 义的细胞治疗指向机体输入或去除细胞制剂，以增强或减弱机体的免疫应答，恢复 机体的正常功能与状态，如使用各种细胞性血液成分、细胞疫苗、干细胞移植、免疫 细胞治疗等。狭义的细胞治疗是取患者自身或无关供体的免疫细胞在体外经特异性抗 原和细胞因子刺激，活化、增殖后再输回患者体内，使其发挥作用。细胞治疗根据 细胞来源和类型可以分为体细胞治疗、干细胞治疗和肿瘤细胞颗粒抗原主动免疫治 疗等。 （一）体细胞治疗 体细胞治疗又称为细胞（肿瘤）免疫疗法，是利用人体自身的部分免疫系统来攻击 癌细胞，从而达到抑制甚至杀灭癌细胞的目的。目前常用的免疫治疗细胞包括：自体树 突状细胞（DC 细胞）疫苗，自然杀伤细胞（NK 细胞），自体细胞因子诱导的杀伤细胞 （CIK 细胞），自体树突状细胞（DC 细胞）和刺激 CIK 细胞（DC-CIK 细胞）。该疗法通 过采集人体自身免疫细胞，经由体外培养使其数量成千上万倍增多，然后再回输到人体 以杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞。 1. DC 细胞治疗 DC 细胞是人体内抗原提呈能力最强的细胞。DC 细胞治疗通过采 医学细胞-正文.indd 271 2018-5-18 17:32:10
第十五章细胞与疾病的诊断治疗用病人自体的单核细胞在体外培养诱导生成DC，负载相应的肿瘤抗原：制成负载肿瘤抗原的DC，再将这些DC细胞注人体内后刺激体内的肿瘤杀伤性淋巴细胞增殖，发挥长期肿瘤监视和杀伤作用，达到消灭肿瘤的目的。2.NK细胞治疗NK细胞（naturalkillercell）属于大颗粒淋巴细胞，是机体重要的免疫细胞，具有广谱抗肿瘤细胞作用，其不依赖于抗原刺激作用，就可以非特异地直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞，对肺癌、肝癌、卵巢癌、食管癌、结肠癌、胃癌等均有效果，在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用。3.CIK细胞治疗CIK细胞即细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-inducedkillercell），是一种新型的免疫活性细胞。CIK细胞增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，如同“细胞导弹”，能精确“点射”肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞，尤其对手术后或放射化学治疗后的患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发。（二）干细胞治疗干细胞治疗是利用人体干细胞的分化和修复原理，把健康的干细胞移植到患者或自已体内，以达到修复病变细胞或重建功能正常的细胞和组织的目的。1.干细胞治疗的类型（1）干细胞移植：泛指将各种来源的正常造血干细胞在患者接受超剂量化学（放射）治疗后，通过静脉输注移植入受体内，以替代原有的病理性造血干细胞，从而使患者正常的造血及免疫功能得以重建。（2）十细胞再生技术：是一种利用十细胞的复制、再生能力治疗疾病的技术，也称为自体骨髓干细胞再生术或自体骨髓干细胞移植技术。（3）自体干细胞免疫疗法：是通过调控细胞因子，修复受损的组织细胞，然后通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制受损细胞的增殖及其免疫反应，从而发挥免疫重建的功能。2.干细胞治疗的安全性干细胞是一种未分化未成熟的细胞，其细胞表面的抗原表达很微弱，患者自身的免疫系统对这种未分化细胞的识别能力很低，避免了器官移植引起的免疫排斥反应及过敏反应等。干细胞治疗除了极少数患者有轻微的发热、头痛外，无严重不良反应发生。（三）CAR-T细胞治疗嵌合抗原受体（chimericantigenreceptor，CAR）由来源于单克隆抗体的轻链（VL）和重链（VH）组成，中间由带韧性的铰链区连接形成单链抗体的胞外抗原结合区、跨膜区和胞内信号转导区组成。通过将识别肿瘤相关抗原的单链抗体和胞内信号域“免疫受体酪氨酸活化基序”在体外进行基因重组，生成重组质粒，再在体外通过转染技术转染到患者的T细胞，使患者T细胞表达肿瘤抗原受体，转染后经过纯化和大规模扩增后的T细胞，称为合抗原受体T细胞（CAR-T细胞。CAR-T细胞在体内、外都具有对特定肿瘤抗原高度亲和性及对抗原负载细胞高效杀伤特性（图15-1，图15-2)。272医学细胞--正文.indd_2722018-5-1817:32:
www.hep.com.cn 272 第十五章 细胞与疾病的诊断治疗 用病人自体的单核细胞在体外培养诱导生成 DC，负载相应的肿瘤抗原，制成负载肿瘤 抗原的 DC，再将这些 DC 细胞注入体内后刺激体内的肿瘤杀伤性淋巴细胞增殖，发挥长 期肿瘤监视和杀伤作用，达到消灭肿瘤的目的。 2. NK 细胞治疗 NK 细胞（natural killer cell）属于大颗粒淋巴细胞，是机体重要 的免疫细胞，具有广谱抗肿瘤细胞作用，其不依赖于抗原刺激作用，就可以非特异 地直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞，对肺癌、肝癌、卵巢癌、食管癌、结肠 癌、胃癌等均有效果，在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用。 3. CIK 细胞治疗 CIK 细 胞 即 细 胞 因 子 诱 导 的 杀 伤 细 胞（cytokine-induced killer cell），是一种新型的免疫活性细胞。CIK 细胞增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的 免疫特性。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，如同“细胞导弹”，能精确“点射”肿 瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞，尤其对手术后或放射化学治疗后的患者效果 显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发。 （二）干细胞治疗 干细胞治疗是利用人体干细胞的分化和修复原理，把健康的干细胞移植到患者或自 己体内，以达到修复病变细胞或重建功能正常的细胞和组织的目的。 1. 干细胞治疗的类型 （1）干细胞移植：泛指将各种来源的正常造血干细胞在患者接受超剂量化学（放 射）治疗后，通过静脉输注移植入受体内，以替代原有的病理性造血干细胞，从而使患 者正常的造血及免疫功能得以重建。 （2）干细胞再生技术：是一种利用干细胞的复制、再生能力治疗疾病的技术，也称 为自体骨髓干细胞再生术或自体骨髓干细胞移植技术。 （3）自体干细胞免疫疗法：是通过调控细胞因子，修复受损的组织细胞，然后通过 细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制受损细胞的增殖及其免疫反应，从而发挥免疫重 建的功能。 2. 干细胞治疗的安全性 干细胞是一种未分化未成熟的细胞，其细胞表面的抗原表 达很微弱，患者自身的免疫系统对这种未分化细胞的识别能力很低，避免了器官移植引 起的免疫排斥反应及过敏反应等。干细胞治疗除了极少数患者有轻微的发热、头痛外， 无严重不良反应发生。 （三）CAR-T 细胞治疗 嵌合抗原受 体（chimeric antigen receptor，CAR） 由 来 源 于 单 克 隆 抗 体 的 轻 链 （VL）和重链（VH）组成，中间由带韧性的铰链区连接形成单链抗体的胞外抗原结 合区、跨膜区和胞内信号转导区组成。通过将识别肿瘤相关抗原的单链抗体和胞内信 号域“免疫受体酪氨酸活化基序”在体外进行基因重组，生成重组质粒，再在体外通 过转染技术转染到患者的 T 细胞，使患者 T 细胞表达肿瘤抗原受体，转染后经过纯化 和大规模扩增后的 T 细胞，称为嵌合抗原受体 T 细胞（CAR-T 细胞）。CAR-T 细胞在 体内、外都具有对特定肿瘤抗原高度亲和性及对抗原负载细胞高效杀伤特性（图 15-1， 图 15-2）。 医学细胞-正文.indd 272 2018-5-18 17:32:11
第二节遗传病的诊断治疗单克降抗体TCR-CD3复合体肿瘤抗原4抗原结合区嵌合抗跨膜区原受体信号转导区图15-1CAR结构示意图冷藏的供体正常T细胞CAR-T细胞修饰?淋巴系统障碍患者癌症患者提取细胞不良反应检测输回患者体内肿瘤活检肿瘤浸润淋巴细胞扩散IWV图15-2CAR-T细胞肿瘤治疗流程第二节遗传病的诊断治疗、遗传病的诊断遗传病的诊断是指医生根据患者的症状、各种辅助检查结果，结合遗传学分析，对患者是否患有某种遗传病做出的判断。它是遗传病预防和治疗的基础，也是开展遗传咨询工作的前提。根据诊断时间的不同，遗传病的诊断可分为现症病人诊断（symptomaticdiagnosis）、症状前诊断（presymptomaticdiagnosis）和产前诊断（prenataldiagnosis）。273医学细胞.-正文imdd2732018-5-18 17:32:11
www.hep.com.cn 273 第二节 遗传病的诊断治疗 图 15-1 CAR 结构示意图 图 15-2 CAR-T 细胞肿瘤治疗流程 第二节 遗传病的诊断治疗 一、遗传病的诊断 遗传病的诊断是指医生根据患者的症状、各种辅助检查结果，结合遗传学分析，对 患者是否患有某种遗传病做出的判断。它是遗传病预防和治疗的基础，也是开展遗传咨 询工作的前提。根据诊断时间的不同，遗传病的诊断可分为现症病人诊断（symptomatic diagnosis）、症状前诊断（presymptomatic diagnosis）和产前诊断（prenatal diagnosis）。 医学细胞-正文.indd 273 2018-5-18 17:32:11
第十五章细胞与疾病的诊断治疗（一）现症病人诊断现症病人诊断是根据已出现症状的病人的临床表现，对疾病的诊断和遗传方式的判断。1.常规临床诊断与普通疾病的诊断步骤基本相同，包括听取病人的主诉，询问病史及查体。（1）病史：遗传病大多有家族聚集现象，因此病史的采集极为重要。在病史采集过程中要遵循准确、详尽的原则。除了解一般病史外，还要着重了解病人的家族史、婚姻史和生育史。①家族史：即整个家系患同种疾病的历史，应充分反映父系和母系各家族成员的发病情况，确保准确性、真实性和完整性。②婚姻史：应重点了解结婚的年龄、次数、配偶健康状况及是否近亲结婚等。③生育史：了解生育年龄、子女数目及健康状况，有无早产史、死产史和流产史，妊娠早期是否患过病毒性疾病，有无接触过药物、电离辐射、有害化学物质等致畸因素，病人出生时是否有过产伤、室息等。此外，还要注意收养、过继、非婚生子女等情况。（2）症状与体征：是病人就诊的主要原因，也是遗传病诊断的重要线索。遗传病与普通疾病在症状和体征上有相同性，例如，遗传病往往会表现出智力低下，像唐氏综合征、苯丙酮尿症、半乳糖血症都具有智力低下的症状；但新生儿室息、颅脑损伤、脑炎等普通疾病亦可引起智力低下。每一种遗传病还都有它本身特异性的征候群，如唐氏综合征大多伴有特殊面容，智力低下，耳位低及双手通掌概率增加等，这些都为初步诊断提供线索，当然还需要通过进一步的实验室检查确诊。同时，还要注意病人身体的发育程度、智力水平、性器官和第二性征发育状况、肌张力及出生时蹄哭声是否正常。2.系谱分析系谱分析可用于：区分患者是否患有遗传病，是单基因病还是多基因病；若是单基因病，遗传方式是哪一种：遗传咨询中个体患病风险的计算，基因定位中的连锁分析；区别具有遗传异质性的疾病，以及同一遗传病的不同类型。系诺分析绘制系谱时应注意：①完整性：一个完整的系谱至少应包括三代以上家族成员的惠病情况、婚姻情况以及生育情况，死亡者要尽可能查清死因，近亲婚配、死胎、流产也要详细记录在系谱中。②可靠性：由于病人或代诉人受文化水平、精神状态等因素的影响而表述不准确，或因某些原因（如重婚、再婚、非婚生子女、养子女等）有顾虑而隐满真实情况或提供虚假资料，会造成系谱不真实等。分析系谱时应注意：（1由于存在遗传异质性，可能将不同的遗传病误认为同一种遗传病。②由于外显不全而呈现隔代遗传现象，不要误认为是隐性遗传病；③延迟显性的遗传病，某些年轻病人尚未表现症状，需要特别注意，以免影响分析的准确性；④各种遗传病存在一定的自然突变率，不能仅仅因为是“散发”病例就盲目定为隐性遗传病，也可能是因为新发基因突变造成的。③显性和隐性概念的相对性，同一遗传病由于判断所依据的指标不同，所得出的遗传方式的结论可能不同。此外，还要注意一些非孟德尔式遗传和具有特殊遗传方式的疾病，如线粒体遗传病、多基因病、遗传印记、动态突变，以上现象在系谱分析时都要加以注意。3.细胞遗传学检查主要适用于染色体异常综合征的诊断，可直接观察到染色体异常。细胞遗传学检查（1）核型分析：是确诊染色体病的主要方法，染色体检查的适应证有：①智力发育不全者及其父母。②生长迟缓或伴有其他先天畸形者。③夫妻中有染色体274医学细胞--正文.indd-2742018-5-1817:32:
www.hep.com.cn 274 第十五章 细胞与疾病的诊断治疗 （一）现症病人诊断 现症病人诊断是根据已出现症状的病人的临床表现，对疾病的诊断和遗传方式的 判断。 1. 常规临床诊断 与普通疾病的诊断步骤基本相同，包括听取病人的主诉，询问 病史及查体。 （1）病史：遗传病大多有家族聚集现象，因此病史的采集极为重要。在病史采集过 程中要遵循准确、详尽的原则。除了解一般病史外，还要着重了解病人的家族史、婚姻 史和生育史。①家族史：即整个家系患同种疾病的历史，应充分反映父系和母系各家族 成员的发病情况，确保准确性、真实性和完整性。②婚姻史：应重点了解结婚的年龄、 次数、配偶健康状况及是否近亲结婚等。③生育史：了解生育年龄、子女数目及健康状 况，有无早产史、死产史和流产史，妊娠早期是否患过病毒性疾病，有无接触过药物、 电离辐射、有害化学物质等致畸因素，病人出生时是否有过产伤、窒息等。此外，还要 注意收养、过继、非婚生子女等情况。 （2）症状与体征：是病人就诊的主要原因，也是遗传病诊断的重要线索。遗传病与 普通疾病在症状和体征上有相同性，例如，遗传病往往会表现出智力低下，像唐氏综合 征、苯丙酮尿症、半乳糖血症都具有智力低下的症状；但新生儿窒息、颅脑损伤、脑炎 等普通疾病亦可引起智力低下。每一种遗传病还都有它本身特异性的征候群，如唐氏综 合征大多伴有特殊面容，智力低下，耳位低及双手通贯掌概率增加等，这些都为初步诊 断提供线索，当然还需要通过进一步的实验室检查确诊。同时，还要注意病人身体的发 育程度、智力水平、性器官和第二性征发育状况、肌张力及出生时啼哭声是否正常。 2. 系谱分析 系谱分析可用于：区分患者是否患有遗传病，是单基因病还是多基因 病；若是单基因病，遗传方式是哪一种；遗传咨询中个体患病风险的计算，基因定位中的 连锁分析；区别具有遗传异质性的疾病，以及同一遗传病的不同类型。 绘制系谱时应注意：①完整性：一个完整的系谱至少应包括三代以上家族成员的患 病情况、婚姻情况以及生育情况，死亡者要尽可能查清死因，近亲婚配、死胎、流产也 要详细记录在系谱中。②可靠性：由于病人或代诉人受文化水平、精神状态等因素的影 响而表述不准确，或因某些原因（如重婚、再婚、非婚生子女、养子女等）有顾虑而隐 瞒真实情况或提供虚假资料，会造成系谱不真实等。 分析系谱时应注意：①由于存在遗传异质性，可能将不同的遗传病误认为同一种遗 传病。②由于外显不全而呈现隔代遗传现象，不要误认为是隐性遗传病；③延迟显性的 遗传病，某些年轻病人尚未表现症状，需要特别注意，以免影响分析的准确性；④各种 遗传病存在一定的自然突变率，不能仅仅因为是“散发”病例就盲目定为隐性遗传病， 也可能是因为新发基因突变造成的。⑤显性和隐性概念的相对性，同一遗传病由于判断 所依据的指标不同，所得出的遗传方式的结论可能不同。此外，还要注意一些非孟德 尔式遗传和具有特殊遗传方式的疾病，如线粒体遗传病、多基因病、遗传印记、动态突 变，以上现象在系谱分析时都要加以注意。 3. 细胞遗传学检查 主要适用于染色体异常综合征的诊断，可直接观察到染色体 异常。 （1） 核 型 分 析： 是 确 诊 染 色 体 病 的 主 要 方 法， 染 色 体 检 查 的 适 应 证 有： ①智力发育不全者及其父母。②生长迟缓或伴有其他先天畸形者。③夫妻中有染色体 系谱分析 细胞遗传学检查 医学细胞-正文.indd 274 2018-5-18 17:32:12
第二节遗传病的诊断治疗异常，如平衡易位、嵌合体等。④家族中已有染色体异常或先天畸形的个体，再次生育时。③多发性流产的夫妇。③原发性闭经和女性不孕症。①无精子症和不育的男性。③两性内外生殖器畸形者。35岁以上的高龄孕妇。身材高大，性情粗暴的男性。染色体检查标本可取自外周血、骨髓、胸腹水、活检组织等身体的各种组织细胞和胎儿的皮肤、脐带血、羊水脱落细胞、绒毛细胞、受精卵卵裂细胞等。（2）性染色质检查：包括X染色质和Y染色质的检查，对两性畸形和性染色体数目异常的疾病诊断有一定价值，但确诊仍需依靠染色体检查。（3）荧光原位杂交技术：荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization，FISH）是以荧光素标记的探针与分裂中期的染色体或分裂间期的染色体（质）杂交，可以显示中期染色体数量或结构的变化或间期染色体数目及微小结构的变化。4.生化检查主要是对蛋白质和酶分子结构或功能活性的检测，还包括酶促反应过程中底物或产物的检查。该方法适用于分子病、先天性代谢缺陷、免疫缺陷等遗传病的诊断。（1）蛋白质和酶的检查：蛋白质的变异型主要靠电泳技术、免疫技术、肽链和氨基酸序列分析技术来区分。分析酶变异型的方法主要有酶动力学、免疫反应等技术。检查标本主要取材于血液。表15-1列举了部分可以通过酶活性检测的遗传代谢缺陷病。表15-1常见通过酶活性检测的遗传代谢缺陷病疾病名称检查的酶材料白化病毛囊酪氨酸酶福枫糖尿病支链酮酸脱羧酶肝、白细胞、成纤维细胞肝苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶对羧苯丙酮酸羟化酶肝、肾酪氨酸血症 I肝酪氨酸氨基转移酶酪氨酸血症Ⅱ半乳糖-磷酸尿苷转移酶半乳糖血症红细胞黑朦性痴呆氨基己糖酶白细胞糖原贮积症I 型葡萄糖-6-磷酸酶肠黏膜糖原贮积症Ⅱ型α-1，4-葡萄糖苷酶皮肤成纤维细胞糖原贮积症Ⅲ型红细胞脱支酶红细胞支化酶糖原贮积症IV型白细胞、皮肤成纤维细胞糖原贮积症V型白细胞肝磷酸化酶高苯丙氨酸血症二氢啶还原酶皮肤成纤维细胞血清进行性肌营养不良肌酸磷酸激酶（2）代谢产物的检查：检测某些代谢产物质和量的改变，可间接反映酶的变化，从而对疾病做出诊断。例如，苯丙酮尿症（PKU）血清苯丙氨酸浓度增高，尿苯丙酮酸、苯乳酸、苯乙酸含量增加。表15-2列举了部分通过血清或尿液检测的遗传代谢缺陷病。275医学细胞-正文.indd27520185-1817:32:12
www.hep.com.cn 275 第二节 遗传病的诊断治疗 异常，如平衡易位、嵌合体等。④家族中已有染色体异常或先天畸形的个体，再次生 育时。⑤多发性流产的夫妇。⑥原发性闭经和女性不孕症。⑦无精子症和不育的男性。 ⑧ 两性内外生殖器畸形者。⑨ 35 岁以上的高龄孕妇。⑩身材高大，性情粗暴的男性。 染色体检查标本可取自外周血、骨髓、胸腹水、活检组织等身体的各种组织细胞和胎儿 的皮肤、脐带血、羊水脱落细胞、绒毛细胞、受精卵卵裂细胞等。 （2）性染色质检查：包括 X 染色质和 Y 染色质的检查，对两性畸形和性染色体数目 异常的疾病诊断有一定价值，但确诊仍需依靠染色体检查。 （3）荧光原位杂交技术：荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是 以荧光素标记的探针与分裂中期的染色体或分裂间期的染色体（质）杂交，可以显示中 期染色体数量或结构的变化或间期染色体数目及微小结构的变化。 4. 生化检查 主要是对蛋白质和酶分子结构或功能活性的检测，还包括酶促反应过 程中底物或产物的检查。该方法适用于分子病、先天性代谢缺陷、免疫缺陷等遗传病的 诊断。 （1）蛋白质和酶的检查：蛋白质的变异型主要靠电泳技术、免疫技术、肽链和氨基 酸序列分析技术来区分。分析酶变异型的方法主要有酶动力学、免疫反应等技术。检查 标本主要取材于血液。表 15-1 列举了部分可以通过酶活性检测的遗传代谢缺陷病。 表 15-1 常见通过酶活性检测的遗传代谢缺陷病 疾病名称 检查的酶 材料 白化病 酪氨酸酶 毛囊 枫糖尿病 支链酮酸脱羧酶 肝、白细胞、成纤维细胞 苯丙酮尿症 苯丙氨酸羟化酶 肝 酪氨酸血症Ⅰ 对羧苯丙酮酸羟化酶 肝、肾 酪氨酸血症Ⅱ 酪氨酸氨基转移酶 肝 半乳糖血症 半乳糖 - 磷酸尿苷转移酶 红细胞 黑 性痴呆 氨基己糖酶 白细胞 糖原贮积症Ⅰ型 葡萄糖 -6- 磷酸酶 肠黏膜 糖原贮积症Ⅱ型 α-1，4- 葡萄糖苷酶 皮肤成纤维细胞 糖原贮积症Ⅲ型 红细胞脱支酶 红细胞 糖原贮积症Ⅳ型 支化酶 白细胞、皮肤成纤维细胞 糖原贮积症Ⅵ型 肝磷酸化酶 白细胞 高苯丙氨酸血症 二氢喋啶还原酶 皮肤成纤维细胞 进行性肌营养不良 肌酸磷酸激酶 血清 （2）代谢产物的检查：检测某些代谢产物质和量的改变，可间接反映酶的变化，从 而对疾病做出诊断。例如，苯丙酮尿症（PKU）血清苯丙氨酸浓度增高，尿苯丙酮酸、 苯乳酸、苯乙酸含量增加。表 15-2 列举了部分通过血清或尿液检测的遗传代谢缺陷病。 医学细胞-正文.indd 275 2018-5-18 17:32:12