载体系统:(1)SV40(猿空泡病毒40)载体:含有SV40复制起点,有功能性SV40早期或晚期启动子的载体。特征:1.可以在多种哺乳动物细胞中获得从低水平到高水平的表达,转染COS细胞可获较高水平表达,2.可表达基因组DNA,也可表达cDNA,插入大小不限。3.一般作为短时表达系统。4.多带有剪接供体和受体信号。5.带有SV40复制起点加尾信号及宿主范围广泛的启动子
载体系统: (1)SV40(猿空泡病毒40)载体:含有SV40复制起点,有 功能性SV40早期或晚期启动子的载体。 特征: 1.可以在多种哺乳动物细胞中获得从低水平到高水平的表 达,转染COS细胞可获较高水平表达。 2. 可表达基因组DNA,也可表达cDNA,插入大小不限。 3. 一般作为短时表达系统。 4. 多带有剪接供体和受体信号。 5.带有SV40复制起点、加尾信号及宿主范围广泛的启动子
(四)、表达系统:1、哺乳动物细胞表达系统:2、昆虫细胞表达系统:3、果蝇细胞表达系统:
(四)、表达系统: 1、哺乳动物细胞表达系统: 2、昆虫细胞表达系统: 3、果蝇细胞表达系统:
(五)、重组体导入受体细胞的方法1、磷酸钙介导的DNA转染:促进DNA的内吞作用(短时表达)。2、脂质体介导的DNA转染:脂质体与膜质性质类似,可以与膜质融合。当DNA被包裹于脂质体内后,脂质体与细胞膜融合将DNA带入细胞内(短时表达)。3、基因的电穿孔转移:通过对细胞施加短暂、高压的脉冲电流,使细胞膜穿孔,DNA可直接进入胞质甚至胞核中。4、显微注射:显微条件下,直接将DNA注入细胞核。5、基因枪:使包裹于金粉上的DNA通过基因枪轰击受体细胞而进入细胞质和细胞核中
(五)、重组体导入受体细胞的方法 1、磷酸钙介导的DNA转染:促进DNA的内吞作用(短时表 达)。 2、脂质体介导的DNA转染:脂质体与膜质性质类似,可以与 膜质融合。当DNA被包裹于脂质体内后,脂质体与细胞膜融合将 DNA带入细胞内(短时表达)。 3、基因的电穿孔转移:通过对细胞施加短暂、高压的脉冲电 流,使细胞膜穿孔,DNA可直接进入胞质甚至胞核中。 4、显微注射:显微条件下,直接将DNA注入细胞核。 5、基因枪:使包裹于金粉上的DNA通过基因枪轰击受体细胞 而进入细胞质和细胞核中
结语:随着对真核细胞内基因产物的功能、调节和相互作用机制的深入了解和新技术的出现,使得真核细胞成为最有吸引力的商业化生物活性蛋白生产的宿主细胞。真核细胞表达外源蛋白可以进行翻译后修饰的特点,也使其成为表达此类蛋白的必不可少的工具。但真核细胞培养复杂、环境要求高、成本高等缺点限制了其使用。另外,目前所用的宿主细胞生理学基本信息知之甚少,也影响了其广泛使用。所以,深入研究宿主细胞特性、提高转染外源基因拷贝数的机制以及详细研究维持细胞稳定性的机制,将为高效利用真核细胞作为表达宿主开辟广阔前景
结语: 随着对真核细胞内基因产物的功能、调节和相互作 用机制的深入了解和新技术的出现,使得真核细胞成为最 有吸引力的商业化生物活性蛋白生产的宿主细胞。真核细 胞表达外源蛋白可以进行翻译后修饰的特点,也使其成为 表达此类蛋白的必不可少的工具。 但真核细胞培养复杂、环境要求高、成本高等缺点 限制了其使用。 另外,目前所用的宿主细胞生理学基本信息知之甚 少,也影响了其广泛使用。 所以,深入研究宿主细胞特性、提高转染外源基因 拷贝数的机制以及详细研究维持细胞稳定性的机制,将为 高效利用真核细胞作为表达宿主开辟广阔前景
三、常用生产用动物细胞的特性W1-38:正常胚肺组织人二倍体细胞系。核型为2n=46。成纤维细胞,能产生胶原。培养基用BME(Eagle'Basalmedium)。10%小牛血清,pH7.2,同工酶为G6PDB型。倍增时间为24h,有限寿命50代。安全用于制备疫苗
三、常用生产用动物细胞的特性 W1-38:正常胚肺组织人二倍体细胞系。 核型为2n=46。成纤维细胞,能产生胶原。 培养基用BME(Eagle’ Basal medium)。 10%小牛血清,pH7.2, 同工酶为G6PDB 型。倍增时间为24h,有限寿命50代。 安全, 用于制备疫苗