·2)在十分偶然的情况下，个别 小量制备物会出现无质粒DNA 的现象。这几乎肯定是由于核酸 沉淀颜粒已同乙醇一起被弃去。 16
16 • ２）在十分偶然的情况下，个别 小量制备物会出现无质粒ＤＮＡ 的现象。这几乎肯定是由于核酸 沉淀颗粒已同乙醇一起被弃去
(三)质粒载体的改造 (I)去掉不必要的DNA区段。 (2)减少限制酶的识别位点，一种酶只保留一个。 (单一的限制性酶切位点) 。 (③)加入易于捡出的选择性标记基因。 (4)对质粒进行安全性改造，要求质粒不能随便 转移。 (⑤)改造或增加基因表达的调控序列
17 （三）质粒载体的改造 ⑴去掉不必要的DNA区段。 ⑵减少限制酶的识别位点，一种酶只保留一个。 （单一的限制性酶切位点）。 ⑶加入易于捡出的选择性标记基因。 ⑷对质粒进行安全性改造，要求质粒不能随便 转移。 ⑸改造或增加基因表达的调控序列
1、质粒pBR322 EcoRI Cial 结构： Aatll Hin dlll EcoRV (1)氨苄青霉素抗性基因(amp Scal BamHI 或Ap) Pyul- Sphl Pstl- Sall 3种限制酶单一识别位点。 Amp Tet Xmalll (2)四环素抗性基因(tetr或 pBR322 Nirut Tc) 4363 内部有7种，启动区内有2种限制 Or Aval 酶单一识别位点。 Bail (3)DNA复制起点(ori) Ndel Pyull Tth1111 18
18 1、质粒pBR322 pBR322 4363 结构： （1）氨苄青霉素抗性基因（amp r 或Apr） 3种限制酶单一识别位点 。 （2）四环素抗性基因（tetr或 Tc r） 内部有7种，启动区内有2种限制 酶单一识别位点 。 （3）DNA复制起点（ori）
DBR322质粒的优点： (1)具有较小的分子量。 EcoRI Clal 4363bp,2.6×10Da, Aat圳 Hin dlll EcoRV (2)具有两种抗菌素抗性 Scal、 BamHI 基因可供作转化子的选择记 Pul、 Sphl 号。 Pstl- Amp Tet Sail Xmalll (3)具较高的拷贝数，而 pBR322 -Nrul 且经过氯霉素扩增之后，每 4363 个细胞中可累积1000~3000 Ori Aval 个拷贝。 Ball (4)对多种常见的限制性 内切核酸酶只含有一个能切 Ndel Pvull Tth1111 割的位点。 19
19 pBR322质粒的优点： （1）具有较小的分子量。 4363bp，2.6×106Da， （2）具有两种抗菌素抗性 基因可供作转化子的选择记 号。 （3）具较高的拷贝数，而 且经过氯霉素扩增之后,每 个细胞中可累积1000～3000 个拷贝。 （4）对多种常见的限制性 内切核酸酶只含有一个能切 割的位点。 pBR322 4363
Pstl Pstl Pstl- Amp Tet' pBR322 Pstl Pstl DNA ligase Transform bacteria 20 Tet
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