Amp Ter 1)限制酶切 2)DNA重组 无DNA插入 有DNA插入 外源DNA AmprTer 转化 AmpT Tcr Ampr Tcs 无菌落 筛选重组子 阳性菌落 ○遍 ● ● 提取DNA 电泳 AmprTcs 重组DNA 21
21 重组DNA Amp r Tc s 提取DNA 电泳 Amp r Amp r Amp r Amp r Tc r Tc r Tc Amp r Tc s Tc s 转化 无菌落 筛选重组子 阳性菌落 2)DNA重组 无DNA插入 有DNA插入 外源DNA 1)限制酶切
BamHI BamH I BemH I BamH i Amp Tet' ↓ pBR322 外源DNA 质粒敲体 BamH I BamH I Tet" Amp DNA连接隔 Amp Tet' Amp Tet' + 转化受菌体 转化受菌体 转化子在含氯卡青露家和 转化子在含氯苄青哥家的 四环察的培举磊上生长 培养基上生长，但在四环累 22 培养基上不生长
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2、pUC质粒载体 Hin dlll 1987年，J.Messing和J.Vieria采 Sphl stl 用MCS技术在pBR322基础上构 Sall /Accl Hinclll Xbal 建的 BamHI Aatll Smal 结构： Kpnl (1)来自于pBR322的Ori Sacl LacZ Scal EcoRl (2)氨苄青霉素的抗性基因 pUC-18 pLac (apr)。 但核苷酸序列发生了变化 Amp 2686 (3)LacZ'基因 码邹一半乳糖酶的α一肽链即氨基末 端 (4)MCS区段 是一段用于插入外源DNA片段的特定区域，由一系列的紧密相 连的限制性内切酶位点组成，而且每个限制性内切酶位点在整 个载体中是唯一的。 23
23 2、pUC质粒载体 1987年，J.Messing和J.Vieria采 用MCS技术在pBR322基础上构 建的 结构： （1）来自于pBR322的Ori （2）氨苄青霉素的抗性基因 (amp r)。 但核苷酸序列发生了变化 （3） LacZ′基因 编码β—半乳糖酶的α—肽链即氨基末 端。 （4）MCS区段 是一段用于插入外源DNA片段的特定区域，由一系列的紧密相 连的限制性内切酶位点组成，而且每个限制性内切酶位点在整 个载体中是唯一的
2、pUC质粒载体 与pBR322相比，pUC质粒载体优点： (1)具有更小的分子量和更高的拷贝数 如pUC8为2750bp,pUCl8为2686bp,控制质粒复制 r0p基因的缺失，平均每个细胞即可达500~700个拷贝 (2)适用于组织化学法检测重组体 通过-互补作用，利用菌落颜色筛选重组子。 (3)具有多克隆位点区段(MCS) 可以定向克隆防止载体自我连接
24 2、pUC质粒载体 与pBR322相比， pUC质粒载体优点： （1）具有更小的分子量和更高的拷贝数 如pUC8为2 750bp，pUCl8为2 686bp，控制质粒复制 rop基因的缺失，平均每个细胞即可达500～700个拷贝 （2）适用于组织化学法检测重组体 通过-互补作用，利用菌落颜色筛选重组子。 （3）具有多克隆位点区段（MCS） 可以定向克隆防止载体自我连接
CAPP 诱导物 CAP PO X ●●●●●0e0●●●0●e● 25
25 I CAP I CAP