第二章 基因工程的载体 和工具酶 第一节载体
1 第二章 基因工程的载体 和工具酶 第一节 载体
引言 基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到 扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表 达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就 必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来实留 作为基因克隆的载体必须具备以下特性： (1)载体必须是复制子。 (2)具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。 (3)具备多克隆位点(MCS),便于外源基因插入。 (4)自身分子量较小，拷贝数高。 (⑤)在宿主细胞内稳定性高。 2
2 引 言 基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到 扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表 达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就 必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来实现。 作为基因克隆的载体必须具备以下特性： ⑴载体必须是复制子。 ⑵具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。 ⑶具备多克隆位点（MCS），便于外源基因插入。 ⑷自身分子量较小，拷贝数高。 ⑸在宿主细胞内稳定性高
Characteristics of vectorsfor gene cloning Foreign gene MCS Marker
3 Characteristics of vectors for gene cloning MCS Marker Foreign gene
一、 质粒载体 (plasimid vectors) (一)质粒载体的生物学特性 (二)质粒载体的制备 (三)质粒载体的改造 4
4 一 、 质粒载体 （plasimid vectors） （一）质粒载体的生物学特性 （二）质粒载体的制备 （三）质粒载体的改造
(一)质粒的生物学特性 (1)质粒是独立于染色体以外的能自主复制的裸露 的双链环状（少数为线形和RNA) DNA分子。 广泛从在于细菌细胞 中，比病毒更简单。 bacterium 在霉菌、蓝藻、酵母 和一些动植物细胞中 plasmid 也发现了质粒，目前 bacterial chromosome 对细菌的质粒研究得 比较深入，特别是大 肠杆菌的质粒。大肠杆 菌的质粒主要有F质粒( 因子)、R质粒（抗药性 因子)和Col质粒（大肠 杆菌素因子)三种。 1um
5 （一）质粒的生物学特性 （1）质粒是独立于染色体以外的能自主复制的裸露 的双链环状(少数为线形和RNA） DNA分子。 广泛从在于细菌细胞 中，比病毒更简单。 在霉菌、蓝藻、酵母 和一些动植物细胞中 也发现了质粒，目前 对细菌的质粒研究得 比较深入，特别是大 肠杆菌的质粒。大肠杆 菌的质粒主要有F质粒（F 因子）、R质粒（抗药性 因子）和Col质粒（大肠 杆菌素因子）三种