将重组体导入宿主细胞1、转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。2、转染：指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。化学的：脂质体介导：原生质体融合：物理的：电穿孔：显微注射：基因枪：生物的：病毒介导：农杆菌转染：
将重组体导入宿主细胞 1、转化：指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导 入细菌的过程。 2、转染：指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细 胞的过程。 化学的：脂质体介导： 原生质体融合： 物理的：电穿孔： 显微注射： 基因枪： 生物的：病毒介导： 农杆菌转染：
化学合成法较小的蛋白质或多肽的编码基因可以用化学合成法合成。必须已知目的基因的核苷酸顺序或目的蛋白质的氨基酸顺序。·费用较高
化学合成法 • 较小的蛋白质或多肽的编码基因可以用化学合成 法合成。 • 必须已知目的基因的核苷酸顺序或目的蛋白质的 氨基酸顺序。 • 费用较高
宿主细胞的选择1、培养容易、生长快速：2、容易获得较高浓度的细胞：3、能利用易得廉价原料：4、不致病、不产生内毒素：5、发热量低、需氧低、适当的发酵温度：6、容易进行DNA重组技术操作：7、产物的产量、产率高：8、产物容易提取纯化：
宿主细胞的选择 1、培养容易、生长快速： 2、容易获得较高浓度的细胞： 3、能利用易得廉价原料： 4、不致病、不产生内毒素： 5、发热量低、需氧低、适当的发酵温度： 6、容易进行DNA重组技术操作： 7、产物的产量、产率高： 8、产物容易提取纯化：
宿主细胞常用两大类：原核细胞：常用有大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等；丝状真菌、真核细胞：常用有酵母、哺乳动物细胞等
宿主细胞常用两大类： 原核细胞：常用有大肠杆菌、枯草 芽胞杆菌、链霉菌等； 真核细胞：常用有酵母、丝状真菌、 哺乳动物细胞等
原核细胞（1)大肠杆菌：基因工程研究中应用最多的原核表达体系。优点：生长快速、代谢简单、遗传体系清楚、容易操作、细胞破碎容易。缺点：①不存在导向内质网的信号序列，分泌能力不足，产品多为胞内产物，提取困难；②蛋自表达后不能修饰加工（糖基化等）；③产物蛋白质N端多余一个蛋氨酸残基，能引起免疫反应；④内毒素存留。（2）枯草芽胞杆菌：优：分泌能力强，蛋白质不形成包含体。缺：产物蛋白质不能糖基化，有很强的胞外蛋白酶对产物降解。(3)链霉菌：作为外源性基因表达受到重视。不致病、使用安全、分泌能力强、表达产物可糖基化
原核细胞 ⑴大肠杆菌：基因工程研究中应用最多的原核表达体系。 优点：生长快速、代谢简单、遗传体系清楚、容易操作、细胞 破碎容易。 缺点： ① 不存在导向内质网的信号序列，分泌能力不足，产 品多为胞内产物，提取困难； ②蛋白表达后不能修饰加工（糖 基化等）； ③产物蛋白质N端多余一个蛋氨酸残基，能引起免 疫反应； ④内毒素存留。 ⑵枯草芽胞杆菌： 优：分泌能力强，蛋白质不形成包含体。 缺：产物蛋白质不能 糖基化，有很强的胞外蛋白酶对产物降解。 ⑶链霉菌： 作为外源性基因表达受到重视。不致病、使用安全、 分泌能力强、表达产物可糖基化