基因工程基本过程海切位点酶切位点抗生素抗性苯内限制性内切酶限制性核酸内切酶)A且的基因片段退火工具：酶限制性内切酶连接酶DNA连接酶逆转录酶DNA聚合酶将重组载体导入细菌细胞核酸酶C...了代细胞基因工程基本过程示意图
基因工程基本过程 • 工具：酶 • 限制性内切酶 • 连接酶 • 逆转录酶 • DNA聚合酶 • 核酸酶
基因克隆一、常用方法：逆转录法和化学合成法一、逆转录法逆转录法就是先分离纯化目的基因的mRNA再反转录成cDNA，然后进行cDNA的克隆表达。·cDNA与模板mRNA序列严格互补，而不含内含子
一、基因克隆 常用方法：逆转录法和化学合成法。 一、逆转录法 • 逆转录法就是先分离纯化目的基因的mRNA， 再反转录成 cDNA，然后进行 cDNA 的克隆表 达。 • cDNA与模板mRNA序列严格互补，而不含内 含子
·逆转录法的步骤、1、mRNA的纯化2、cDNA第一链的合成3、cDNA第二链的合成4、cDNA克隆5、将重组体导入宿主细胞6、cDNA文库的鉴定，7、目的cDNA克隆的分离和鉴定
• 逆转录法的步骤 • 1、mRNA的纯化 • 2、cDNA第一链的合成 • 3、cDNA第二链的合成 • 4、cDNA克隆 • 5、将重组体导入宿主细胞 • 6、cDNA文库的鉴定 • 7、目的cDNA克隆的分离和鉴定
cDNA克隆示意图分离纯化mRNA逆转录酶SS-cDNADNA聚合酶ds-cDNART-PCR
cDNA克隆示意图 mRNA 逆转录酶 ss-cDNA DNA聚合酶 ds-cDNA 分离纯化 RT-PCR
CDNA克隆用于cDNA克隆的载体：细菌质粒（如pBR322、pUC等）插入片段<10kb噬菌体（如入gt10、入gt11等）>10kb人工染色体本大片段动植物病毒根据重组后插入的cDNA能否表达非表达型载体（pBR322及入gt10）表达型载体（pUC及入gt11）有利于目的基因的筛选
cDNA克隆 • 用于cDNA克隆的载体： 细菌质粒（如pBR322、 pUC等）插入片段<10kb 噬菌体（如gt10、 gt11等） >10kb 人工染色体 大片段 动植物病毒 • 根据重组后插入的cDNA能否表达 非表达型载体（pBR322及gt10 ） 表达型载体（pUC及gt11 ）有利于目的基因的筛选