真核细胞(1)酵母是研究基因表达最有效的单细胞真核微生物。优点：基因组小，世代时间短，繁殖迅速，无毒性。能外分泌，产物可糖基化。(2)丝状真菌优点：分泌能力强，能正确进行翻译后加工（肽剪切、糖基化）有成熟的发酵和后处理工艺。（3）哺乳动物细胞优点：表达产物可由重组转化细胞分泌到培养液中，纯化容易。产物是糖基化的接近天然物。缺点：生长慢，生产率低，培养条件苛刻，费用高，培养液浓度稀
真核细胞 ⑴ 酵母 是研究基因表达最有效的单细胞真核微生物。 优点：基因组小，世代时间短，繁殖迅速，无毒性。能外 分泌，产物可糖基化。 ⑵丝状真菌 优点：分泌能力强，能正确进行翻译后加工（肽剪切、 糖基化）有成熟的发酵和后处理工艺。 ⑶哺乳动物细胞 优点：表达产物可由重组转化细胞分泌到培养液中，纯 化容易。产物是糖基化的接近天然物。 缺点：生长慢，生产率低，培养条件苛刻，费用高，培 养液浓度稀
二、天基因表达(一)）原核表达载体表达载体必须具备的条件(1)复制起点，ori(2)克隆位点和筛选标记(3)启动子和终止子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别。(4)翻译的起始信号，即起始密码AUG和SD序列(5)阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才进行转录。外源基因的高效表达往往会抑制宿主细胞的生长、增殖，而阻遏子可使宿主细胞免除此不良影响如：在大肠杆菌中表达非融合蛋白的操纵子必须改建成：细菌启动子一细菌SD序列一起始密码子一结构基因一终止子
二、基因表达 （一）原核表达载体 表达载体必须具备的条件 （1）复制起点，ori （2）克隆位点和筛选标记 （3）启动子和终止子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别。 （4）翻译的起始信号，即起始密码AUG和SD序列。 （5）阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才进行转录。 外源基因的高效表达往往会抑制宿主细胞的生长、增殖，而阻遏子可 使宿主细胞免除此不良影响 如：在大肠杆菌中表达非融合蛋白的操纵子必须改建成：细菌启动子 — 细 菌SD序列 — 起始密码子 — 结构基因 — 终止子
常用表达载体pBV220系统BamHI多克隆位点SalIpst I限制性内切酶Sma1HindIIEcoRIBgl II它已成功终止子地表达了人白AOFNTITePR细胞介素2，Y启动子扰素和肿瘤pBV220坏死因子等外3.66kb阻遏子源基因。-PouIAmpr氨苄青霉素抗性基因复制起始位点ori质粒pBV220的结构P23
常用表达载体 pBV220系统 启动子 多克隆位点 终止子 阻遏子 P23 复制起始位点 它已成功 地表达了人白 细胞介素2，γ 干扰素和肿瘤 坏死因子等外 源基因。 氨苄青霉素抗性基因 限制性内切酶 SD序列
(二)酵母中的基因表达(1)克隆载体一穿梭质粒同时具有在大肠杆菌和酵母中复制和增殖能力的载体。(2)表达载体将酵母菌的启动子和终止子等有关控制序列引入载体的适当位点后，京就构成了酵母菌的表达载体。Avrll资料3：限制磷酶切位点乙肝患者#通美Sacl阳性血清限制解识游序列及幕切位点Bgl3"AOX1(TT)TACGTASnaBIBafllATGCAT乙肝疯DNAPCR技术AvellCCTACC:氢羊青Sat索CACTE桂基因pPIC9KBglllHBsAg基周SaelPPIC9K质检图29.3kb图1AGATBglll...TCTACA.P转化配一培养母维胎重组质粒
(1) 克隆载体-穿梭质粒 同时具有在大肠杆菌和酵母中复制和增殖能力的载体。 (2) 表达载体 将酵母菌的启动子和终止子等有关控制序列引入载体的 适当位点后，就构成了酵母菌的表达载体。 （二）酵母中的基因表达
(三)动物细胞中的基因表达·优点：产物类似于天然产物，容易分离纯化费·缺点：动物细胞生长慢，培养条件苛刻，用高，培养液浓度较小
（三）动物细胞中的基因表达 • 优点：产物类似于天然产物，容易分离纯化 • 缺点：动物细胞生长慢，培养条件苛刻，费 用高，培养液浓度较小