A map of phage入，showing the major genes, Regulator of入 cl,and int gene expression Regulator of Phage DNA Regulator cl gene replication of early genes λrepressor rol proteins Stabilizer D of cll protein Regulator Phage recombination PRMPRE of late genes be proteins OLPL OgPE Origin Lysis exo of replication Excisionase proteins (for excision from Early promoters PAQ chromosome）xis and operators PR Late gene Integrase int promoter Nu1 Cutting of (for integration cos DNA at into chromosome) att cos site for A Terminase ~48 kb packaging W B Nu3 Genes for D head proteins and assembly 2F11 Genes for tail proteins and assembly
29
表达载体常用的噬菌体启动子是P。 调节基因c/则是选择了一个温度敏感性的突变基因c857。 整合在宿主基因组里，或克隆到载体上。 cI857 外源基因 cI857: 30C时阻遏P,外源基因不转录。 42°C时阻遏蛋白失活，外源基因大量转录
cI857: 表达载体常用的噬菌体启动子是PL。 调节基因cI 则是选择了一个温度敏感性的突变基因cI857。 整合在宿主基因组里，或克隆到载体上。 42oC时阻遏蛋白失活，外源基因大量转录 cI857 PL 外源基因 30oC时阻遏PL，外源基因不转录
T7噬菌体启动子 具有高度的特异性，只有T7RNA聚合酶才能使其启动， 故可以使克隆化基因独自得到表达。T7RNA聚合酶的 效率比大肠杆菌RNA聚合酶高5倍左右，它能使质粒沿 模板连续转录几周，许多外源终止子都不能有效地终止 它的序列，因此它可转录某些不能被大肠杆菌RNA聚合 酶有效转录的序列。 这个系统可以高效表达其他系统不能有效表达的基因
具有高度的特异性，只有T7RNA聚合酶才能使其启动， 故可以使克隆化基因独自得到表达。T7RNA聚合酶的 效率比大肠杆菌 RNA聚合酶高5倍左右，它能使质粒沿 模板连续转录几周，许多外源终止子都不能有效地终止 它的序列，因此它可转录某些不能被大肠杆菌RNA聚合 酶有效转录的序列。 这个系统可以高效表达其他系统不能有效表达的基因。 T7噬菌体启动子
实例：pKK223-3载体 哈佛大学的Gilbert:实验室建立的。表达能力强。 组成结构： ①强启动子：tac（trp-ac): trp的-35区 lacUV5的-10区 ②操纵基因： 乳糖操纵子系统。 lac操纵基因
哈佛大学的Gilbert实验室建立的。表达能力强。 实例：pKK223-3 载体 组成结构： ① 强启动子: tac（trp-lac）: trp的-35区 lacUV5的-10区 lac操纵基因 ②操纵基因： 乳糖操纵子系统
③调节基因： 宿主菌染色体上的乳糖操纵子系统。 如JM105菌。 ④终止子： rrnB的强终止子：5 S rRNA转录终止子 ⑤S-D序列和插入位点区： S-D 插入位点区
④终止子： ③调节基因： 宿主菌染色体上的乳糖操纵子系统。 如JM105菌。 rrnB的强终止子: 5S rRNA转录终止子 S-D 插入位点区 ⑤S-D序列和插入位点区：