原核表达系统的注意事项 LI V E 1.外源基因不能带有内含子。 2.必须用cDNA 3.不能直接用真核基因组DNA。 4.必须利用原核细胞的调控原件（启动子等） 5.防止外源基因产物对宿主细胞的毒害
原核表达系统的注意事项 1. 外源基因不能带有内含子。 2. 必须用cDNA 3. 不能直接用真核基因组DNA。 4. 必须利用原核细胞的调控原件（启动子等） 5. 防止外源基因产物对宿主细胞的毒害
一、大肠杆菌表达载体的结构 1、组成元件 满足克隆的要求：ori、amp、MCS 表达元件：promoter、terminator、RBS
一、大肠杆菌表达载体的结构 1、组成元件 •满足克隆的要求：ori、amp、MCS •表达元件：promoter、terminator、RBS
最佳启动子必须具备的条件 ① 必须是一种强启动子 能使外源基因的蛋白产量达到细胞总蛋白的10%-30% 以上。 应呈现低水平的基础转录 便于表达毒性蛋白等。 ③应是可诱导型的 用温度或化学试剂诱导
① 必须是一种强启动子 能使外源基因的蛋白产量达到细胞总蛋白的10%-30% 以上。 ② 应呈现低水平的基础转录 便于表达毒性蛋白等。 ③应是可诱导型的 用温度或化学试剂诱导。 最佳启动子必须具备的条件
常用的有Lac(乳糖启动子)、Trp(色氨酸启动子)、 Tac(乳糖和色氨酸的杂合启动子)、PL(I噬菌体的左 向启动子)、T7噬菌体启动子
常用的有Lac(乳糖启动子)、Trp(色氨酸启动子)、 Tac(乳糖和色氨酸的杂合启动子) 、PL (l噬菌体的左 向启动子)、T7噬菌体启动子
Lac启动子：它来自大肠杆菌的乳糖操纵子 Lac启动子受分解代谢系统的正调控和阻遏物的负调控。 正调控通过CAP因子和cAMP来激活启动子，促使转录进行 负调控则是由阻遏蛋白能与操纵基因结合阻止转录。乳糖 及某些类似物如PTG可诱导转录发生。 调控蛋白 结合乳糖后，操纵子 结合位点发生改变 mRNA 翻译 乳树
Lac启动子受分解代谢系统的正调控和阻遏物的负调控。 正调控通过CAP因子和cAMP来激活启动子，促使转录进行 负调控则是由阻遏蛋白能与操纵基因结合阻止转录。乳糖 及某些类似物如IPTG可诱导转录发生。 Lac启动子：它来自大肠杆菌的乳糖操纵子