引物 5 OH 3 CTAAGCTCGACT 模板 dCTP.dGTP.dATP.dTTP ddATP ddCTP +ddGTP ddTTP GATTCGAGCTGddA GATTCGAGadc GATTCGAGCTddG GATTCGAGCddT GATTCGddA GATTddC GATTCGAddG GATddT GddA GATTCddG GAddT ddG G T 210987654321 m4H UU 40 U HH 4 O 电泳凝胶的放射自显影图 互补链顺序 (c)
化学裂解法(Maxam-Gilbert) 1977 基本步骤： 1、先将DNA的末端之一标记放射性同位素(32P、35S), 2、再将DNA样品分别进行多组具碱基特异性、随机的、 不完全的化学修饰； 3、采用修饰碱基敏感的特异化学试剂在修饰碱基位置断 开DNA链； 4、通过具有可分辨链长短仅一个核苷酸之差的聚丙烯胺 凝胶电泳，将DNA断裂片段按分子大小分离开 5、根据放射自显影胶片上显示的末端标记片段分布情况， 直接读出DNA序列
◼ 基本步骤： 1、先将DNA的末端之一标记放射性同位素（32P、 35S）， 2、再将DNA样品分别进行多组具碱基特异性、随机的、 不完全的化学修饰； 3、采用修饰碱基敏感的特异化学试剂在修饰碱基位置断 开DNA链； 4、通过具有可分辨链长短仅一个核苷酸之差的聚丙烯胺 凝胶电泳，将DNA断裂片段按分子大小分离开 5、根据放射自显影胶片上显示的末端标记片段分布情况， 直接读出DNA序列。 化学裂解法（Maxam-Gilbert） 1977
反应体系 碱基修饰 碱基修饰 主链断裂 断裂点 试剂 反应 试剂 硫酸二甲酯 鸟嘌呤甲基化 六氢吡啶 G G+A 甲酸 脱嘌呤作用 六氢吡啶 G/A C+T 肼 嘧啶开环 六氢吡啶 c/T C 肼（加盐） 胞嘧啶开环 六氢吡啶 C 在化学修饰反应中，通过控制反应温度和反应时间，只有 一小部分碱基被修饰，随后进行断裂反应也是定量
反应体系 碱基修饰 碱基修饰 主链断裂 断裂点 试剂 反应 试剂 G 硫酸二甲酯 鸟嘌呤甲基化 六氢吡啶 G G+A 甲酸 脱嘌呤作用 六氢吡啶 G/A C+T 肼 嘧啶开环 六氢吡啶 C/T C 肼（加盐） 胞嘧啶开环 六氢吡啶 C 在化学修饰反应中，通过控制反应温度和反应时间，只有 一小部分碱基被修饰，随后进行断裂反应也是定量
5-GATCACTACTG-3 硫酸二甲酯 5'*-GATCACTACTG-3 G G+A 甲酸 C+T 肼 C肼 (加盐) 5 *GATCACTACT 5 *GATCACTACTG 5*GATCACTAC 5*GATCACTACTG 5*GATCACTA 5 *GATCACTAC 5 *GATCACT 5*G 5*GATCA 5 *GATCAC 5*GATCAC 5 *GA 5*GATC 5*GATC 5*G 5*GAT 5'*GATCACTACTG 5 *GATCACTACT 5*GATCACTAC 5*GATCACTA 5*GATCACT 5*GATCAC 5*GATCA 5*GATC 5*GAT 5*GA 5*G G A/G
5`-GATCACTACTG-3` 5`*-GATCACTACTG-3` 5`*G 5`* GATCACTACTG 5`*G 5`*GA 5`*GATCA 5`*GATCACTA 5`*GATCACTACTG 5`*GAT 5`*GATC 5`*GATCAC 5`*GATCACT 5`*GATCACTAC 5`*GATCACTACT 5`*GATC 5`*GATCAC 5`*GATCACTAC G G+A C+T C G A/G C/T C 5`*G 5`*GA 5`*GAT 5`*GATC 5`*GATCAC 5`*GATCACTAC 5`*GATCA 5`*GATCACT 5`*GATCACTA 5`*GATCACTAC 5`*GATCACTACT 5`* GATCACTACTG 硫酸二甲酯 甲酸 肼 肼（加盐）
DNA自动测序仪 上述两种方法都不适应大规模DNA测定需要。存在操作 步骠繁琐、效率低、速度慢的缺点，特别是读结果的读 片过程。 1987年发明了一种准确快速的DNA测序方法，即激光测 序法和配套的自动测序仪。（用荧光染料结合引物）。 随后又发明了终止标记系统法
DNA自动测序仪 上述两种方法都不适应大规模DNA测定需要。存在操作 步骤繁琐、效率低、速度慢的缺点，特别是读结果的读 片过程。 1987年发明了一种准确快速的DNA测序方法，即激光测 序法和配套的自动测序仪。（用荧光染料结合引物）。 随后又发明了终止标记系统法