(七添加剂 PCR反应中加入一定浓度的添加剂如DMSO(二甲基 亚砜等可提高PCR扩增效率及特异性 (八PCR循环数 30次是比较合理的循环次数,循环次数太少,产物的量 不多;循环次数过多,则非特异性产物增加。 (九)PCR易发生的问题及解决方法 1没有得到所希望的PCR产物(假阴性) 2所有样品均为阳性(假阳性) 3PCR产物呈片状 4.出现非特异扩增
㈦ 添加剂 PCR反应中加入一定浓度的添加剂如DMSO (二甲基 亚砜)等可提高PCR扩增效率及特异性 ㈧ PCR循环数 30次是比较合理的循环次数，循环次数太少，产物的量 不多；循环次数过多，则非特异性产物增加。 ㈨ PCR易发生的问题及解决方法 ⒈没有得到所希望的PCR产物(假阴性) ⒉所有样品均为阳性(假阳性) ⒊PCR产物呈片状 ⒋出 现非特异扩增
第二节PCR类型 不对称 PCR(asymmetric PCr) 不对称PCR的目的是扩增产生特异长度的单链DNA PCR反应中采用二种不同浓度的引物,PCR结果产生大 量单链DNA。因PCR反应中使用的二种引物浓度不同 步法,因此称不对称PCR,此法产生的单链DNA可用作 杂交探针或DNA测序的模板 进行不对称PCR有二种方法:(1)一步法;(2)两步法 第一次PCR用等浓度的引物,以期获得较多的目的DNA 片段,取第一次扩增产物(含双链PCR片段)用单引物进行 第二次PCR扩增产生单链DNA
第二节 PCR类型 一、不对称PCR(asymmetric PCR) 不对称PCR的目的是扩增产生特异长度的单链DNA。 PCR反应中采用二种不同浓度的引物，PCR结果产生大 量单链DNA。因PCR反应中使用的二种引物浓度不同一 步法，因此称不对称PCR，此法产生的单链DNA可用作 杂交探针或DNA测序的模板。 进行不对称PCR有二种方法：(1) 一步法;(2) 两步法， 第一次PCR用等浓度的引物，以期获得较多的目的DNA 片段，取第一次扩增产物(含双链PCR片段)用单引物进行 第二次PCR扩增产生单链DNA