蛋白分离纯化=细胞破碎1、沉淀分离蛋白提取2、离心分离3、透析与超滤爱蛋白分离纯化4、层析分离蛋白浓缩5、电泳分离蛋白分析或处理6、萃取分离蛋白贮存
1、沉淀分离 2、离心分离 3、透析与超滤 4、层析分离 5、电泳分离 6、萃取分离 三 蛋白分离纯化
沉淀分离沉淀分离是通过改变某些条件或添加某种物质，使蛋白的溶解度降低，而从溶液中沉淀析出，与其它溶质分离的技术过程
1 沉淀分离 沉淀分离是通过改变某些条件或添加某种 物质，使蛋白的溶解度降低，而从溶液中 沉淀析出，与其它溶质分离的技术过程
1)盐析沉淀分离法在盐浓度达到某一界限后，蛋白的溶解度随盐浓度升高而降低，这称为盐析现象。电荷：非等电点状态下带同性电荷1蛋白质分子相互排斥，阻止蛋白质分子的聚集水膜：球状蛋白质分子表面有较多的亲水基团，与水结合，形成水化膜从而阻止蛋白质分子的聚集沉淀机理：破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，蛋白质就会从胶体溶液中沉淀出来
① 电荷：非等电点状态下带同性电荷， 蛋白质分子相互排斥，阻止蛋白质分 子的聚集 ② 水膜：球状蛋白质分子表面有较多的 亲水基团，与水结合，形成水化膜， 从而阻止蛋白质分子的聚集 沉淀机理： 破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，蛋白质就会从 胶体溶液中沉淀出来。 1） 盐析沉淀分离法 在盐浓度达到某一界限后，蛋白的溶解 度随盐浓度升高而降低，这称为盐析现 象
在蛋白质的盐析中，通常采用的中性盐有硫酸铵硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、氯化钠和磷酸钠等。其中以硫酸铵最为常用在盐析时，溶液中硫酸铵的浓度通常以饱和度表示例如50%饱和度可使血清中球蛋白析出，100%饱和度可使血清中白蛋白析出>分离蛋白质组分时，调节溶液pH值至蛋白质的等电点之后再进行盐析，效果会更好，>盐析得到的蛋白质沉淀经过透析脱盐后仍具有生物活性
在蛋白质的盐析中，通常采用的中性盐有硫酸铵、 硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、氯化钠和磷酸钠等。其 中以硫酸铵最为常用。 在盐析时，溶液中硫酸铵的浓度通常以饱和度表示。 例如50%饱和度可使血清中球蛋白析出，100%饱和 度可使血清中白蛋白析出。 Ø 分离蛋白质组分时，调节溶液pH值至蛋白质的等 电点之后再进行盐析，效果会更好。 Ø 盐析得到的蛋白质沉淀经过透析脱盐后仍具有生 物活性
K调整硫酸铵溶液饱和度计算表（硫酸铵最终浓度%饱和度）70253033354550556575802040609010100每升溶液需加入固体硫酸铵的克数0196209243390430472516561561762773133516626711144A10571181371501832163654064494945928625128832694205978912912315518930034038242452062221-25碗3061499312558074839085933063X8酸铵起始浓度%饱和度3030629412754619162198235273314356449337410712431423337712125292F35639416423850631129200278319403197631321682052452853769L45996532134(3317125L50661011373376214302392-553367103141179264353-63469105143765701073419027570357215323775369880771579079
调整硫酸铵溶液饱和度计算表