意义-2药用蛋白表达问题 Yeast:28% E.coli:54% 1.表达速率过快 Intramolecular 2.表达温度过高 Misfolding Unfolded Animal cell:21% E.coli inclusion body route occupies about a half 0 Intermediate 3.蛋白富含二硫键 (molten globul 4.pI接近胞内pH Intermolecular Misfolding Aggregate 5.缺乏分子伴侣 86916728Ky×8:66长·3：合0
意义-2 药用蛋白表达问题 1. 表达速率过快 2. 表达温度过高 3. 蛋白富含二硫键 4. pI接近胞内pH 5. 缺乏分子伴侣 严禁复制
包涵体优点 1.避免蛋白质被降解 Cell Disruption Centrifugation IB IB Isolation Remove 2.杂蛋白少方便纯化 Cell Debris TB Washing u Dissolved Denaturant 了解重折叠过程！ Solubilization Refolding Partial Removal of Denaturant 3.无活性可进行处理 Refolding Complete Removal 分 of Denaturant Post-refolding purification step
包涵体优点 1. 避免蛋白质被降解 2. 杂蛋白少方便纯化 3. 无活性可进行处理 了解重折叠过程！ 严禁复制
意义-3蛋白质分子设计需要 PDMGYVEI IEQPKQRGMRERYKCEGRSAGS IPGERSTDTTKTHPTIKINGYTGPGTVRISLV PDU1 70 77 MAM 质粒构建 KDPPHRPHPHELVGKDCRDGFYEAELCPDRC IHS FONLGIOCVKKRDLEQAI 10 110 120 130 137 人从入门到精通 PDENNPFQVPIEEQRGDYDLNAVRLCFQVTVRDPSGRPLRLPPVLSHP IFDNRAPNTAELKIC 150 160 170 10 130 157 J化代 n 8的1刀 连将 VNRNSGSCLCCDE IFLLCOKVOKEDLEVYFTOPGIEARGS SOADVHROVA VERT 210 220 20 240 20 257 ◆- - PDBADPSLQAPVRVSMQLRRPSDRELSEPMEFQYLPDGSLSSGSSLSSPSAGAAPRVLFGEWL 270 250 250 010 sw—n -nn-An PDILGEISSGCYEGLOWLDEARTCFRVPWKHFARKDLSEADARIFKAWAVARGRWPPSSRGGG 081019 100 1040 1050 1060 1070 构建质粒 氨基酸合成
意义- 3 蛋白质分子设计需要 构建质粒 氨基酸合成 严禁复制