后置于37℃水浴锅中备用。翠丸附翠附图1图2（1）用吸管或移液器取1滴精子悬液放在载玻片上，低倍镜观察精子的形态和运动。（2）取精子悬液涂片（若精子数量少，可离心后操作此步），用0.3%甲苯胺蓝液染色，高倍镜观察精子的形态结构。甲苯胺蓝液染色步骤：精子涂片空气中干燥5min→数滴甲醇-冰乙酸溶液（3：1）室温固定5min→0.3%甲苯胺蓝染液室温5min→水洗→观察。2．体外抑精子实验将精液标本分为2组：实验组和对照组。实验组：在37℃恒温条件下，将50u1精子悬液置于1mleppendorf管中，取0.2ml一定浓度的抑精子药液与其充分混合，分别于混合后30秒、5min、10min和30min取一滴置于载玻片上，显微镜下计数10个视野，记录活动精子百分率。对照组：将50μ1.精子悬液与0.2m1生理盐水混合，其余操作同上。比较不同时间点两组活动精子的百分率。3.精子低渗肿胀试验取0.2ml精子悬液置于lmleppendorf管中，与50μ1生理盐水混合，1分钟后检测精子存活百分率。同时，取0.1m1处理后的精子混悬液于试管中与1ml蒸馏水（低渗液）混合，在37℃下培养30分钟，然后在相差显微镜下观察100个精子，计算精子尾肿胀（精子尾部呈泡状）百分率
后置于 37℃ 水浴锅中备用。 （1）用吸管或移液器取 1 滴精子悬液放在载玻片上,低倍镜观察精子的形态和 运动。 （2）取精子悬液涂片( 若精子数量少,可离心后操作此步),用 0.3% 甲苯胺蓝液 染色,高倍镜观察精子的形态结构。 甲苯胺蓝液染色步骤: 精子涂片空气中干燥 5min → 数滴甲醇-冰乙酸溶液(3∶1) 室温固定 5min→0.3%甲苯胺蓝染液室温 5min→水洗→观察。 2． 体外抑精子实验 将精液标本分为 2 组:实验组和对照组。 实验组:在 37℃ 恒温条件下,将 50μl 精子悬液置于 1ml eppendorf 管 中,取 0.2ml 一定浓度的抑精子药液与其充分混合,分别于混合后 30 秒、5min、 10min 和 30min 取一滴置于载玻片上,显微镜下计数 10 个视野,记录活动精子 百分率。 对照组:将 50μl 精子悬液与 0.2ml 生理盐水混合,其余操作同上。比较不 同时间点两组活动精子的百分率。 3． 精子低渗肿胀试验 取 0.2ml 精子悬液置于 1ml eppendorf 管中,与 50μl 生理盐水混合,1 分钟后检测精子存活百分率。 同时,取 0.1ml 处理后的精子混悬液于试管中与 1ml 蒸馏水( 低渗液) 混合,在 37℃ 下培养 30 分钟,然后在相差显微镜下观 察 100 个精子,计算精子尾肿胀( 精子尾部呈泡状) 百分率
取0.2ml精子悬液与50u1抑精子药液（浓度为上述抑精实验所用浓度的1／2）混合，1分钟后检测精子存活百分率。同时，按上述方法检测精子尾肿胀百分率，比较两组精子的膜功能。[实验观察]1）低倍镜下可见精子数量多，活动度好。高倍镜下可见小鼠精子头部呈扁椭圆形，头的顶端呈镰刀状，尾部细长（见下图）2）与对照组相比，实验（精子悬液与抑精药混合）组中活动精子百分率明显减少，高倍镜下可见死亡精子尾部僵直。3）在生理盐水对照组标本中，镜下可见多个尾部肿胀的精子（即精子尾部呈泡状，详见本教材视频），实验组标本中则少见这种现象。C肿胀的精子麗部星空泡样A特子卖部未护胀的精子尾邮精子头部精子头部图图1：取出的小鼠睾丸和附睾图2：分离后的小鼠附睾图3：显微镜下观察到的精子图4：甲苯胺蓝染色后观察到的精子
取 0.2ml 精子悬液与 50μl 抑精子药液( 浓度为上述抑精实验所用浓度 的 1 / 2) 混合,1 分钟后检测精子存活百分率。同时,按上述方法检测精子尾肿 胀百分率,比较两组精子的膜功能。 [实验观察] 1）低倍镜下可见精子数量多，活动度好。 高倍镜下可见小鼠精子头部呈扁椭圆形，头的顶端呈镰刀状，尾部细长（见 下图） 2）与对照组相比，实验（精子悬液与抑精药混合）组中活动精子百分率明显减 少，高倍镜下可见死亡精子尾部僵直。 3）在生理盐水对照组标本中，镜下可见多个尾部肿胀的精子（即精子尾部呈泡 状，详见本教材视频），实验组标本中则少见这种现象。 图 1：取出的小鼠睾丸和附睾 图 2：分离后的小鼠附睾 图 3：显微镜下观察到的精子 图 4：甲苯胺蓝染色后观察到的精子