生物化学与分子生物学实验蛋白质定量分析BCA法/双缩脲法
生物化学与分子生物学实验 蛋白质定量分析 BCA法/双缩脲法
分光光度法·定义：根据物质对光的吸收特性和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法·Lambert-Beer定律A=KLC
分光光度法 • 定义： 根据物质对光的吸收特性和吸收强度， 对物质进行定性和定量的分析方法。 • Lambert-Beer定律 A=KLC
Lambert-Beer定律·入射光强度为Io，透射光强度为ItIt·则透光度T=×100%lo·吸光度(A)或称光密度(OD)或称消光度(E)A= -lgTIoIA-KLC三?C：物质的浓度(mg/ml,mol/L)，L：光程（cm），K为吸光系数或消光系数
• 入射光强度为I0，透射光强度为It， • 则透光度 T= • 吸光度(A)或称光密度(OD)或称消光度(E) A= - lgT I0 It A=KLC 100% Io It Lambert-Beer 定律 C •C：物质的浓度(mg/ml, mol/L)，L：光程（cm），K为吸光系数或消光系数
波长的选择选择待测物质最大吸收峰的波长（入max）1.使被测溶液有的适当的光密度（0.1-0.7）2.干扰影响降至最低限度3.标准曲线在尽可能大的范围内接近直线
选择待测物质最大吸收峰的波长（lmax） 1.使被测溶液有的适当的光密度（0.1-0.7） 2.干扰影响降至最低限度 3.标准曲线在尽可能大的范围内接近直线 波长的选择
待测溶液的浓度计算·（1)利用吸光系数（消光系数）求出待测溶液的浓度（2)利用标准管法计算待测溶液的浓度·（3）利用标准曲线进行换算
待测溶液的浓度计算 • (1)利用吸光系数（消光系数）求出待测溶液的浓度 • (2)利用标准管法计算待测溶液的浓度 • (3)利用标准曲线进行换算