静置2~3min,使白细胞下沉。 5.计数在低倍镜下，计数四角的四个大方格中的白细胞数(W),将 总数乖以50，即得出每微升（μ1）血中的白细胞数，再乘10°换算为每升 血液中的白细胞数。 计算公式如上： 白细胞数/L=四个大方格白细胞数们）x10×20×10_ 20×10°1L 式中：四个大方格内白细胞总数÷4，算出每个大方格（即0.1μl)内 白细胞平均数。 ×10换算为μl。 ×20为血液稀释倍数 ×10°将1μl换算为1L。 【注意事项】 1.吸取稀释液和血液时，要准确无误。 2.一定要待稀释液转化为棕褐色后方可进行计数，此时红细胞已完全破 坏，否则可因红细胞残丰而干扰计数，使结果偏高。 3.计数池内细胞分布要均匀，各大方格间细胞数相差不超过10个。 4.白细胞数显著减少(<3×10L)时，扩大计数面积（数8个大方格）， 或吸40μl血，降低稀释倍数：若白细胞太高(>15×10L),可增加稀释倍 数。 5.外周血出现大量有核红细胞时，因其不能被白细胞稀释液破坏，可影 响白细胞计数，故应进行校正。 【参考值】成人(4~1)×10/L
静置 2～3min，使白细胞下沉。 5.计数 在低倍镜下，计数四角的四个大方格中的白细胞数（W），将 总数乖以 50，即得出每微升（l）血中的白细胞数，再乘 106 换算为每升 血液中的白细胞数。 计算公式如上： ( ) L W W L 10 / 20 10 20 10 4 / 6 9 = = 四个大方格白细胞数 白细胞数 式中：四个大方格内白细胞总数÷4，算出每个大方格（即 0.1l）内 白细胞平均数。 ×10 换算为l。 ×20 为血液稀释倍数 ×106 将 1l 换算为 1L。 【注意事项】 1.吸取稀释液和血液时，要准确无误。 2.一定要待稀释液转化为棕褐色后方可进行计数，此时红细胞已完全破 坏，否则可因红细胞残丰而干扰计数，使结果偏高。 3. 计数池内细胞分布要均匀，各大方格间细胞数相差不超过 10 个。 4.白细胞数显著减少（3×109 /L）时，扩大计数面积（数 8 个大方格）， 或吸 40l 血，降低稀释倍数；若白细胞太高（15×109 /L），可增加稀释倍 数。 5.外周血出现大量有核红细胞时，因其不能被白细胞稀释液破坏，可影 响白细胞计数，故应进行校正。 【参考值】成人 （4～1）×109 /L
6个月至2岁婴儿(11~12)×10九 新生儿(15~20)×10/九 【临床意义】白细胞总数的增减主要受中性粒细胞数量的影响，其次， 嗜酸性粒细胞、淋马细胞等数量上的改变也会引起白细胞总数变化。白细 胞总数增减的临床意义详见白细胞分类计算中临床意义的有关内容。 (二)白细胞分类计数 【要求】掌握白细胞分类计数方法和白细胞分类计数的参考值及临床 意义。 【原理】白细胞的胞质、胞核和胞桨颗粒等含有不同的化学成分，其 与各种染料的亲和力不同。经染色后能着上不同的颜色，根据颜色的差异， 可将白细胞区别并进行分类计数。 【试剂】 l.Wright-Giemsa染液（瑞-吉氏染液） Wright染料 1g Giemsa染料 0.3g 甲醇（分析纯）500ml 2.磷酸盐缓冲液（无水）pH6.4~6.8) 磷酸二氢钾（无水）6.64g 磷酸氢二钠（无水）2.56g 加蒸馏水 1000ml 【器材与仪器】微量吸管、载玻片、推片、香柏油、显微镜 【操作】
6 个月至 2 岁婴儿（11～12）×109 /L 新生儿 （15～20）×109 /L 【临床意义】白细胞总数的增减主要受中性粒细胞数量的影响，其次， 嗜酸性粒细胞、淋马细胞等数量上的改变也会引起白细胞总数变化。白细 胞总数增减的临床意义详见白细胞分类计算中临床意义的有关内容。 （二）白细胞分类计数 【要求】掌握白细胞分类计数方法和白细胞分类计数的参考值及临床 意义。 【原理】白细胞的胞质、胞核和胞桨颗粒等含有不同的化学成分，其 与各种染料的亲和力不同。经染色后能着上不同的颜色，根据颜色的差异， 可将白细胞区别并进行分类计数。 【试剂】 1．Wright-Giemsa 染液（瑞-吉氏染液） Wright 染料 1g Giemsa 染料 0.3g 甲醇（分析纯） 500ml 2.磷酸盐缓冲液（无水）(pH6.4～6.8) 磷酸二氢钾（无水）6.64g 磷酸氢二钠（无水）2.56g 加蒸馏水 1000ml 【器材与仪器】微量吸管、载玻片、推片、香柏油、显微镜 【操作】
1.血涂片制备，取末梢血一滴，置于载玻片一端，将推片的一端，放 在血滴前面，逐渐后移接触血滴，血滴好沿推片散开，然后使推片与载玻 片间成30°~45°夹角，平稳向前推动至载玻片的另一端，玻片上便留下 一均匀薄层血膜。自然干燥（图1-6）。 2.染色①用蜡笔在血膜两头画线，以防染液溢出：②用瑞-吉氏染液 3~5滴，覆盖整个血膜，固定细胞0.5~lmin;③滴加等量或稍多的磷酸 盐缓冲液于血膜上，用吸球将其吹匀，染色5~10mi;④平放玻片，用流 水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸吸干，即可镜检。 3.镜检在低倍镜下观察细胞着色情况，然后选择血涂片体尾交界部 染色良好的区域，在油镜下按一定的方向顺序对所见到的每一个白细胞进 行分类，既不得重复亦不遗漏，共计数100或200个白细胞。求出各类白 细胞所占的百分率。 【注意事项】 1.玻片需清洁，血膜干透后才可固定染色。 2染色时间的长短与染液的浓度、室温高低及有核细胞多少有关。染液 浓度愈小、室温愈低、细胞愈多、所需时间愈长。必要时可增加染液量或 延长时间，为此，应先在低倍镜下观察有核细胞着色是否清楚。 3.染液不宜过少，以免蒸发干燥，导致染料沾着于血膜上不易冲掉
1.血涂片制备，取末梢血一滴，置于载玻片一端，将推片的一端，放 在血滴前面，逐渐后移接触血滴，血滴好沿推片散开，然后使推片与载玻 片间成 30°～45°夹角，平稳向前推动至载玻片的另一端，玻片上便留下 一均匀薄层血膜。自然干燥（图 1-6）。 2.染色 ①用蜡笔在血膜两头画线，以防染液溢出；②用瑞-吉氏染液 3～5 滴，覆盖整个血膜，固定细胞 0.5～1min；③滴加等量或稍多的磷酸 盐缓冲液于血膜上，用吸球将其吹匀，染色 5～10min；④平放玻片，用流 水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸吸干，即可镜检。 3.镜检 在低倍镜下观察细胞着色情况，然后选择血涂片体尾交界部 染色良好的区域，在油镜下按一定的方向顺序对所见到的每一个白细胞进 行分类，既不得重复亦不遗漏，共计数 100 或 200 个白细胞。求出各类白 细胞所占的百分率。 【注意事项】 1.玻片需清洁，血膜干透后才可固定染色。 2.染色时间的长短与染液的浓度、室温高低及有核细胞多少有关。染液 浓度愈小、室温愈低、细胞愈多、所需时间愈长。必要时可增加染液量或 延长时间，为此，应先在低倍镜下观察有核细胞着色是否清楚。 3.染液不宜过少，以免蒸发干燥，导致染料沾着于血膜上不易冲掉
用推片压血滴 吸附血液成一线 调好推片角度 推片 推片完成 图1-6血涂片的制备 4.冲洗时不可先倒掉染液，应让流水从血膜一端缓缓将染液冲去，以免 染料残渣附在血膜上。 5染色过程时，可用甲醇或乙醇适当脱色；染色过浅需复染时，应先用 缓冲液将染液稀释好再染。 6每批染液，缓冲液均需试染，以便掌握好染色时间及加缓冲液的比例。 【参考值】见表1-2
4.冲洗时不可先倒掉染液，应让流水从血膜一端缓缓将染液冲去，以免 染料残渣附在血膜上。 5.染色过程时，可用甲醇或乙醇适当脱色；染色过浅需复染时，应先用 缓冲液将染液稀释好再染。 6.每批染液，缓冲液均需试染，以便掌握好染色时间及加缓冲液的比例。 【参考值】见表 1-2
表12外周血各类白细胞的百分率及绝对值 细胞类型 百分率(%) 绝对值10L 中性粒细胞(N) 杆状核(St) 1~5 0.04~0.5 分叶核(Sg) 50~70 2.07.0 嗜酸粒细胞(E) 0.5≈8 0.020.5 嗜碱粒细胞(B) 0~1 0~0.1 淋巴细胞(L) 20~40 0.84.0 单核细胞(M) 3~8 0.12~0.8 【临床意义】见表1-3 表1-3白细胞分类计数的临床意义 分类 常见原因 中性粒细胞增多 急性化脓性感染，严重组织损伤，急性溶血，急性在出血，争性中毒，白 血病及恶性肿脑 中性粒细胞减少 某些革兰阴性杆菌感染，病毒感染，再生障碍性贫血等血液病，慢性理化 损伤，自身免疫性疾病，脾功能亢进等 嗜酸粒细胞增多 寄生虫病，药物过敏及变态反应性疾病，皮肤病，血液病和某些恶性肿瘤， 高及某些传染病等 嗜酸粒细胞减少伤寒、副伤寒初期，大手术及烧伤等应激状态，长期应用肾上腺皮质激素 嗜碱粒细胞减少 慢性粒细胞性白血病，骨髓纤维化，转移性恶性肿瘤，过敏性疾病，糖尿 柄等 某些病毒感染，结核病，淋巴细胞性恶性疾病，移植排斥反应，自身免疫 淋巴细胞增多 病等 淋巴细胞减少 接触放射线，应用肾上腺皮质激素，免疫缺陷病 单核核细胞增多 争性传染病恢复期，淋巴溜瘤，某些血液病如单核细胞白血病，某些感染 性疾病如结核、疟疾等 三、血小板计数 【要求】了解血小板计数方法，掌握血小板计数的参考值及临床意义
表 12 外周血各类白细胞的百分率及绝对值 细胞类型 百分率（%） 绝对值 109 /L 中性粒细胞（N） 杆状核（St） 1～5 0.04～0.5 分叶核（Sg） 50～70 2.0～7.0 嗜酸粒细胞（E） 0.5～8 0.02～0.5 嗜碱粒细胞（B） 0～1 0～0.1 淋巴细胞（L） 20～40 0.8～4.0 单核细胞（M） 3～8 0.12～0.8 【临床意义】见表 1-3 表 1-3 白细胞分类计数的临床意义 分类 常见原因 中性粒细胞增多 急性化脓性感染，严重组织损伤，急性溶血，急性在出血，争性中毒，白 血病及恶性肿瘤 中性粒细胞减少 某些革兰阴性杆菌感染，病毒感染，再生障碍性贫血等血液病，慢性理化 损伤，自身免疫性疾病，脾功能亢进等 嗜酸粒细胞增多 寄生虫病，药物过敏及变态反应性疾病，皮肤病，血液病和某些恶性肿瘤， 高及某些传染病等 嗜酸粒细胞减少 伤寒、副伤寒初期，大手术及烧伤等应激状态，长期应用肾上腺皮质激素 嗜碱粒细胞减少 慢性粒细胞性白血病，骨髓纤维化，转移性恶性肿瘤，过敏性疾病，糖尿 病等 淋巴细胞增多 某些病毒感染，结核病，淋巴细胞性恶性疾病，移植排斥反应，自身免疫 病等 淋巴细胞减少 接触放射线，应用肾上腺皮质激素，免疫缺陷病 单核核细胞增多 争性传染病恢复期，淋巴溜瘤，某些血液病如单核细胞白血病，某些感染 性疾病如结核、疟疾等 三、血小板计数 【要求】了解血小板计数方法，掌握血小板计数的参考值及临床意义