【试剂】氰化高铁血红蛋白(iCN)转化液： 氰化钾(KCN) 0.05g 高铁氰化[KFe(CN)J 0.20g 非离子表面活性剂(Triton X-100) 1.0ml 无水磷酸二氢钾(KHPO) 0.14g 蒸馏水加至 1000m1(纠正H至7.0~ 7.4) 血红蛋白转化液为淡黄色透明溶液，配成后用滤纸过滤，置棕色瓶中， 在室温中可保存数月，在冰箱中稳定时间更长，但勿使结冰。该液以H0为 空白，于540nm测其吸光度应<0.001。 【器材与仪器】试管、刻度吸管、微量吸管、分光光度计。 【操作】 1.血红蛋白转化用微量吸管取末梢血24μl,加入5 ml HiCN转化液 另，充分混匀，静置5min,使充分反应。 2.比色如果使光光度计比色，波长540nm,光径1.0cm,以转化液或 蒸馏水为空白，测定样本吸光度(A) 3.计算如果使用符合H0标准的分光光度计，可根据样本吸光度值 (A)直接计算出血红蛋白浓度。 计算公式为：a10-20C:251=43677 44 式中：64458是国际公认的血红蛋白分子量，64458mg/L即为1mmol/九 血红蛋白的物质浓度，除以1000换算为gL。 44是1mmo1/L血红蛋白在1.00cm光径，540nm条件下的吸光
【试剂】氰化高铁血红蛋白(HiCN)转化液： 氰化钾（KCN） 0.05g 高铁氰化[K3Fe（CN）6] 0.20g 非离子表面活性剂（Triton X-100） 1.0ml 无水磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.14g 蒸馏水加至 1000ml(纠正 pH 至 7.0～ 7.4) 血红蛋白转化液为淡黄色透明溶液，配成后用滤纸过滤，置棕色瓶中， 在室温中可保存数月，在冰箱中稳定时间更长，但勿使结冰。该液以 H2O 为 空白，于 540nm 测其吸光度应＜0.001。 【器材与仪器】试管、刻度吸管、微量吸管、分光光度计。 【操作】 1.血红蛋白转化 用微量吸管取末梢血 24l，加入 5ml HiCN 转化液 另，充分混匀，静置 5min，使充分反应。 2.比色 如果使光光度计比色，波长 540nm，光径 1.0cm，以转化液或 蒸馏水为空白，测定样本吸光度（A） 3.计算 如果使用符合 WHO 标准的分光光度计，可根据样本吸光度值 （A）直接计算出血红蛋白浓度。 计算公式为： 251 367.7 1000 64458 44 ( 540 ) ( / ) = = A A HiCN Hgb g L 式中：64458 是国际公认的血红蛋白分子量，64458mg/L 即为 1mmol/L 血红蛋白的物质浓度，除以 1000 换算为 g/L。 44 是 1mmol/L 血红蛋白在 1.00cm 光径，540nm 条件下的吸光
系数。 251是稀释倍数。 4.当使用的分光光度计不符合WH0标准时，可先使用已知浓度的血红蛋 白标准液制作，C的标准曲线，然后根据样本吸光度在标准曲线上查取 血红蛋白浓度。 【注意事项】 1.使用光电比色计之前须校正仪器。 2.采血用的血红蛋白吸管20μ1的准确性士1%以内，5.0m1移液管的准 确性应在士0.5%以内。当使用标准曲线时，应定期对标准曲线进行校正。 3.样吕在读数前应清晰，如发生混蚀，可能有以下几种情况： (1)血中白细胞过多，可离心后取上清比色。 (2)血中有异常球蛋白，可在溶液中加0.1g碳酸钾。 (3)有硫化血红蛋白或血红蛋白C时，则可用蒸馏水按1：1稀释，结 果乘以2即可。 (4)氰化试剂是剧毒品，在配试剂时要严格按剧毒品操作。如发现变 绿、弯混则不能使用，pH低于7.0时应进行调整。 4.血红蛋白转化液不能贮存在塑料瓶中，否则CN浓度下降，致使结果 偏低。 【参考值】成年男性120~160g/L 成年女性110~150g/L 新生儿170~200g/L 【临床意义】血红蛋白减少和增多临床意义与红细胞计数相似。但在某
系数。 251 是稀释倍数。 4.当使用的分光光度计不符合 WHO 标准时，可先使用已知浓度的血红蛋 白标准液制作，HiCN 的标准曲线，然后根据样本吸光度在标准曲线上查取 血红蛋白浓度。 【注意事项】 1.使用光电比色计之前须校正仪器。 2.采血用的血红蛋白吸管 20l 的准确性±1%以内，5.0ml 移液管的准 确性应在±0.5%以内。当使用标准曲线时，应定期对标准曲线进行校正。 3.样吕在读数前应清晰，如发生混蚀，可能有以下几种情况： （1）血中白细胞过多，可离心后取上清比色。 （2）血中有异常球蛋白，可在溶液中加 0.1g 碳酸钾。 （3）有硫化血红蛋白或血红蛋白 C 时，则可用蒸馏水按 1：1 稀释，结 果乘以 2 即可。 （4）氰化试剂是剧毒品，在配试剂时要严格按剧毒品操作。如发现变 绿、弯混则不能使用，pH 低于 7.0 时应进行调整。 4.血红蛋白转化液不能贮存在塑料瓶中，否则 CN-浓度下降，致使结果 偏低。 【参考值】成年男性 120～160g/L 成年女性 110～150g/L 新 生 儿 170～200g/L 【临床意义】血红蛋白减少和增多临床意义与红细胞计数相似。但在某
些贫血时，由于红细胞平均血红蛋白含量不同，红细胞和血红蛋白减少程 度可不一致，如小细胞低色素贫血时，血红蛋白减少比红细胞减少更为显 著，而大细胞性贫血时红细胞的减少比血红蛋白减少为显著。因些同时测 定红细胞和血红蛋白，对贫血类型的鉴别有重要意义。 (三)血细胞比容测定（温氏法） 【要求】了解血细胞比容测定的原理及方法，掌握血细胞比容参考值及 其临床意义。 【原理】抗凝全血经离心沉淀后，可测出下沉的血细胞在全血中所占体 积的百分比，即血细胞比容。 【试剂】EDTA-K或双草酸盐抗凝剂。 【器材与仪器】 1.5ml注射器、试管。 2.毛细滴管长约12cm,口径不大于 2mm。 3.温氏(Wintrobe)管上以lmm为间隔 温氏管 刻有0~100mm的刻度（图1-5）。 【操作】 1.试管内加入抗凝剂，每管内加 EDTA-K2或双草酸盐溶液0.5ml,烤干备用。 2.静脉采血2ml,立即注入抗凝管中， 图1一5温氏管 (Wintrobe管) 混匀。 3.用细长的毛细滴管取摇匀的抗凝血，从温氏管底部徐徐注入血液，随
些贫血时，由于红细胞平均血红蛋白含量不同，红细胞和血红蛋白减少程 度可不一致，如小细胞低色素贫血时，血红蛋白减少比红细胞减少更为显 著，而大细胞性贫血时红细胞的减少比血红蛋白减少为显著。因些同时测 定红细胞和血红蛋白，对贫血类型的鉴别有重要意义。 （三）血细胞比容测定（温氏法） 【要求】了解血细胞比容测定的原理及方法，掌握血细胞比容参考值及 其临床意义。 【原理】抗凝全血经离心沉淀后，可测出下沉的血细胞在全血中所占体 积的百分比，即血细胞比容。 【试剂】EDTA-K2或双草酸盐抗凝剂。 【器材与仪器】 1.5ml 注射器、试管。 2.毛细滴管 长约 12cm，口径不大于 2mm。 3.温氏（Wintrobe）管上以 1mm 为间隔， 刻有 0～100mm 的刻度（图 1-5）。 【操作】 1. 试管 内加 入抗凝 剂， 每管内 加 EDTA-K2或双草酸盐溶液 0.5ml，烤干备用。 2.静脉采血 2ml，立即注入抗凝管中， 混匀。 3.用细长的毛细滴管取摇匀的抗凝血，从温氏管底部徐徐注入血液，随
血液平面上升而渐渐向上抽提毛细滴管，直到血液至“100”刻度处，切勿 产生气泡。 4.将注入血液的温氏管置水平离心机中，以相对离心力2264g(即有效 半径22.5cm),即300rpm速度离心30min,读取红细胞层高度，然后再离 心l0mi至红细胞不再下降为止，离心后血液分为5层，从上至下依次是： 血浆层：白色乳糜层（主要为血小板）：灰红色层（主要为白细胞和有核细 胞)；暗红色层（主要为被血细胞代谢还原的还原血红蛋白）；鲜红色层（为 含习红细胞)。 5.读取以暗红色红细胞层为准的红细胞柱高的毫米数，乘以0.01报告 (或以百分比报告)。 【注意事项】 1.所有器材必须清洁干燥，以防溶血。 2.抗凝剂与血液要充分混合，防止部分血液发生凝固，出现小凝块。 3.离心力大小直接影响结果，本试验一定要在达2264g的条件下进行离 心。 4.采血后应尽快试验，最好不超过3h。 【参考值】男性0.42~0.49(42%~49%) 女性0.37一0.48(37%一48%) 【临床意义】 1.血细胞比容减少见于各种贫血。 2.血细胞比容增多见于，①呼种原因所致的血液浓缩，如大量呕吐、腹 泻、失水、大面积烧伤等：②真性红细胞增多症有时血细胞比容可高达0.80
血液平面上升而渐渐向上抽提毛细滴管，直到血液至“100”刻度处，切勿 产生气泡。 4.将注入血液的温氏管置水平离心机中，以相对离心力 2264g（即有效 半径 22.5cm），即 300rpm 速度离心 30min，读取红细胞层高度，然后再离 心 10min 至红细胞不再下降为止，离心后血液分为 5 层，从上至下依次是： 血浆层；白色乳糜层（主要为血小板）；灰红色层（主要为白细胞和有核细 胞）；暗红色层（主要为被血细胞代谢还原的还原血红蛋白）；鲜红色层（为 含习红细胞）。 5.读取以暗红色红细胞层为准的红细胞柱高的毫米数，乘以 0.01 报告 （或以百分比报告）。 【注意事项】 1.所有器材必须清洁干燥，以防溶血。 2.抗凝剂与血液要充分混合，防止部分血液发生凝固，出现小凝块。 3.离心力大小直接影响结果，本试验一定要在达 2264g 的条件下进行离 心。 4.采血后应尽快试验，最好不超过 3h。 【参考值】男性 0.42～0.49(42%～49%) 女性 0.37～0.48(37%～48%) 【临床意义】 1.血细胞比容减少见于各种贫血。 2.血细胞比容增多见于，①呼种原因所致的血液浓缩，如大量呕吐、腹 泻、失水、大面积烧伤等；②真性红细胞增多症有时血细胞比容可高达 0.80
左右：③继发性红细胞增多症，如新生儿、高原居民及慢性心肺疾患。 (四)红细胞三种平均值参数计算 【要求】掌握红细胞三种平均值的计算方法，参考值及其在分血形态学 分类中的意义。 【计算方法】 1.平均红细胞容积(mean corpuscular volume MCV)系指平均每个红 细胞的体积，以f1(飞升)为单位表示。 平均红细胞容积)-每升血液中的红细胞比容×10： 每升血液中的红细胞数 *1L=10pg 2.平均红细胞血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC)系指平均每升红细胞中所含血红蛋白浓度（克数） 以g/L表示。 平均红细胞血红蛋白浓度g/)-每升血液中血红蛋白浓度 每升血液中红细胞比容 【参考值】手工法 MCV82~92f1 MCH 27~31 pg MCHC 320~360g/L 血细胞分析仪法 MCV80~100f1 MCH 27~34 pg MCHC 320~360g/L 【注意事项】 1.红细胞计数、血红蛋白测定和血细胞比容测定必须使用同一部位采
左右；③继发性红细胞增多症，如新生儿、高原居民及慢性心肺疾患。 （四）红细胞三种平均值参数计算 【要求】掌握红细胞三种平均值的计算方法，参考值及其在分血形态学 分类中的意义。 【计算方法】 1.平均红细胞容积（mean corpuscular volume MCV）系指平均每个红 细胞的体积，以 fl（飞升）为单位表示。 15 ( ) = 10 每升血液中的红细胞数 每升血液中的红细胞比容 平均红细胞容积 fl *1L=1012 pg 2. 平 均 红 细 胞 血 红 蛋 白 浓 度 （ mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC）系指平均每升红细胞中所含血红蛋白浓度（克数） 以 g/L 表示。 ( ) 每升血液中红细胞比容 每升血液中血红蛋白浓度 平均红细胞血红蛋白浓度 g / L = 【参考值】手工法 MCV 82～92 fl MCH 27～31 pg MCHC 320～360g/L 血细胞分析仪法 MCV 80～100 fl MCH 27～34 pg MCHC 320～360g/L 【注意事项】 1.红细胞计数、血红蛋白测定和血细胞比容测定必须使用同一部位采