上篇实验部分 第一章血液一般检查 一、红细胞检查 (一)红细胞计数（目视计数法） 【要求】熟悉红细胞计数方法，掌握红细胞计数参考值及临床意义。 【原理】用红细胞稀释液将血液稀释一定倍数，置于血细胞计数板内， 于显微镜下计数一定容积内的红细胞数，然后再计算出每升血液内的红细 胞数。 【试剂】 红细胞稀释液[赫姆(ayem)稀释液] 氯化钠 1.0g 硫酸钠(NaS010H0) 5.0g(或无水硫酸钠2.5g) 氯化高汞 0.5g 蒸馏水加至 200.0ml(过滤后备用) 【器材与仪器】 1.试管、玻棒、2ml玻璃吸管、显微镜。 2.一次性微量吸管：上有10如l的刻度线。 3.血细胞计数板（改良牛鲍计数板）：见图1-1，血细胞计数板中央有 两个刻度平台（即血细胞计数池），每个平台划分为9个大方格，每个大方 格长宽各为1m,其面积为lm2,加盖玻片后的深度为0.lmm,故每一大方 格的容积为0.1mm(0.1μl)。四角的四个大方格等分为16个中方格，作为
上篇 实验部分 第一章 血液一般检查 一、红细胞检查 （一）红细胞计数（目视计数法） 【要求】熟悉红细胞计数方法，掌握红细胞计数参考值及临床意义。 【原理】用红细胞稀释液将血液稀释一定倍数，置于血细胞计数板内， 于显微镜下计数一定容积内的红细胞数，然后再计算出每升血液内的红细 胞数。 【试剂】 红细胞稀释液[赫姆(Hayem)稀释液] 氯化钠 1.0g 硫酸钠（Na2SO410H2O） 5.0g（或无水硫酸钠 2.5g） 氯化高汞 0.5g 蒸馏水加至 200.0ml（过滤后备用） 【器材与仪器】 1.试管、玻棒、2ml 玻璃吸管、显微镜。 2.一次性微量吸管：上有 10l 的刻度线。 3.血细胞计数板（改良牛鲍计数板）：见图 1-1，血细胞计数板中央有 两个刻度平台（即血细胞计数池），每个平台划分为 9 个大方格，每个大方 格长宽各为 1mm，其面积为 1mm 2，加盖玻片后的深度为 0.1mm，故每一大方 格的容积为 0.1mm3（0.1l）。四角的四个大方格等分为 16 个中方格，作为
白细胞计数用（图1-2）：中央一大方格用双线等分为25个中方格，每个中 方格又等分为16个小方格，作为红细胞计数之用（图1-2、图1-3）。 【操作】 1.取试管一支，准确加入红细胞稀释液2ml。 2.消毒皮肤，用采血针刺破皮肤，使血液自动流出，拭去第一滴血，用 ~次性微量吸管准确取血10μl。 3.擦去管尖外面多余的血液，将吸管插入稀释液底部，轻轻将血全部排 出，然后吸取其上稀释液清洗吸管内残余血液2~3次。 4.混匀后用玻棒蘸取红细胞悬液，充入血细胞计数池内，注意充池的液 量要适宜，使之恰好充满，无气泡及多余液体溢出。静置2~3mim,待红细 胞下沉后进行计数。 计数 盖玻片 团1一1血细胞计数板（改良牛鲍计数板 国1-之红自时区示意国
白细胞计数用（图 1-2）；中央一大方格用双线等分为 25 个中方格，每个中 方格又等分为 16 个小方格，作为红细胞计数之用（图 1-2、图 1-3）。 【操作】 1.取试管一支，准确加入红细胞稀释液 2ml。 2.消毒皮肤，用采血针刺破皮肤，使血液自动流出，拭去第一滴血，用 一次性微量吸管准确取血 10l。 3.擦去管尖外面多余的血液，将吸管插入稀释液底部，轻轻将血全部排 出，然后吸取其上稀释液清洗吸管内残余血液 2～3 次。 4.混匀后用玻棒蘸取红细胞悬液，充入血细胞计数池内，注意充池的液 量要适宜，使之恰好充满，无气泡及多余液体溢出。静置 2～3min，待红细 胞下沉后进行计数
5.将血细胞计数板置于显微镜下，用低 倍镜观察计数池内红细胞分布状况是否 均匀，如红细胞颁均匀，即可用高倍镜进 行计数。计数中央大方格中的四个角上和 中心的中方格（共5个方格）的红细胞。 为准确计数，对于压在线上的细胞计数可 采用压在想邻的两侧线者计入（如左侧及上侧），压在另相邻的两侧线（如 左侧及下侧)者不计数的原则进行计数（即数上不数下，数左不数右）见 图1-4。 6.计算将5个中方格所得的红细胞数的总和(N)乘以10,000即为每 微升()血液内的红细胞数，再乘106换算为每升(L)血液内的红细胞 数。 计算公式为： 红细L=N×号x10x20x10=N=10°-高×1021L 式中：N为5个中方格内数得的红细胞数。 ×背是将5个中方格红细胞数换算成一个大方（即01）的红细 胞数。 ×10是将一个大方格和容积(0.1μ)换算成1l血液布什的红细 胞数。 ×200为血液稀释倍数。 ×106将ul换算成L。 7.计数完毕后，用清水将计数盘和盖玻片冲洗干净，待干后备用
5.将血细胞计数板置于显微镜下，用低 倍镜观察计数池内红细胞分布状况是否 均匀，如红细胞颁均匀，即可用高倍镜进 行计数。计数中央大方格中的四个角上和 中心的中方格（共 5 个方格）的红细胞。 为准确计数，对于压在线上的细胞计数可 采用压在想邻的两侧线者计入（如左侧及上侧），压在另相邻的两侧线（如 左侧及下侧）者不计数的原则进行计数（即数上不数下，数左不数右）见 图 1-4。 6.计算 将 5 个中方格所得的红细胞数的总和（N）乘以 10,000 即为每 微升（l）血液内的红细胞数，再乘 106 换算为每升（L）血液内的红细胞 数。 计算公式为： L N L N N 10 / 100 10 200 10 10 5 25 / 6 1 0 1 2 红细胞 = = = = 式中：N 为 5 个中方格内数得的红细胞数。 5 25 是将 5 个中方格红细胞数换算成一个大方（即 0.1l）的红细 胞数。 10 是将一个大方格和容积（0.1l）换算成 1l 血液布什的红细 胞数。 200 为血液稀释倍数。 106 将l 换算成 L。 7.计数完毕后，用清水将计数盘和盖玻片冲洗干净，待干后备用
【注意事项】 1.显微镜物镜接近计数板时应注意，勿损坏计数板及镜头。 2.计数时进入显微镜的光线要适中，否则不易找到方格。计数池内的细 胞分布要均匀，各中方格的细胞相差不应超过士10%，否则重新计数。 3.计数不准确的常见原因。 (1)采血不符合要求，如局部皮肤水肿、炎症、穿刺过浅、过度挤压 等。 (2)稀释液量不准，特别在夏季，稀释液放置过久，水分蒸发。 (3)操作太慢，血液凝固。 (4)如微量吸管内壁沾有白细胞和稀液，会使红细胞破坏，故应先做 红细胞计数。 (5)红细胞悬液混匀不充分。 (6)计数池充池不均匀，或充池后移动玻片。 (7)计数时对压在线上的红细胞，未按压线红细胞计灵敏原则进行计 数，造成计数遗漏或重复。 (8)当白细胞极度增多时，将使红细胞计数结果假性偏高，故应对红 细胞计数结果进行校正。校正方法：校正后红细胞计数结果=校正前红细胞 计数结果-白细胞计数结果。 【参考值】成年男性(4.05.5)×10L 成年女性(3.5~5.0)×102/几 新生儿(6.0~7.0)×102/几 【临床意义】
【注意事项】 1.显微镜物镜接近计数板时应注意，勿损坏计数板及镜头。 2.计数时进入显微镜的光线要适中，否则不易找到方格。计数池内的细 胞分布要均匀，各中方格的细胞相差不应超过±10%，否则重新计数。 3.计数不准确的常见原因。 （1）采血不符合要求，如局部皮肤水肿、炎症、穿刺过浅、过度挤压 等。 （2）稀释液量不准，特别在夏季，稀释液放置过久，水分蒸发。 （3）操作太慢，血液凝固。 （4）如微量吸管内壁沾有白细胞和稀液，会使红细胞破坏，故应先做 红细胞计数。 （5）红细胞悬液混匀不充分。 （6）计数池充池不均匀，或充池后移动玻片。 （7）计数时对压在线上的红细胞，未按压线红细胞计灵敏原则进行计 数，造成计数遗漏或重复。 （8）当白细胞极度增多时，将使红细胞计数结果假性偏高，故应对红 细胞计数结果进行校正。校正方法：校正后红细胞计数结果=校正前红细胞 计数结果-白细胞计数结果。 【参考值】成年男性（4.0～5.5）×1012/L 成年女性（3.5～5.0）×1012/L 新 生 儿（6.0～7.0）×1012/L 【临床意义】
1.红细胞增多 (1)相对性增多：如剧烈呕吐、严重腹泻、大面积烧伤、在汗、多尿 等，使体内水分丧失过多，导致血液浓缩。 (2)绝对性增多：多由于缺氧而致红细胞代偿增多，红细胞增多的程 度与缺氧程度成正比。少数病便是由造血系统疾病所致。 1)生理性增多：见于胎儿、新生儿、高原居民等。剧烈的体育运动、 体力劳动、情绪激动等红细胞也可一过性增多。 2)病理性增多：见于慢性心肺功能不全疾患，如肺气肿、肺源性心脏 病及某些发绀型先天性心脏病等。此外真性红细胞增多症时，红细胞增多 可达(7.0~10.0)×10/L/ 2.红细胞增少 (1)生理性减少：见于妊娠中、晚期，血容量增加使血液稀释，红细 胞相对减少。 (2)病理性减少：是指血液中红细胞数量绝对减少。见于造血功能障 碍、造血原料供应不足，红细胞丢失和破坏过多等原因引起的各种贫血。 (二)血红蛋白测定（氰化高铁血红蛋白测定法） 【要求】熟悉氰化高铁血红蛋白测定方法，掌握血红蛋白测定的参考值 和临床意义。 【原理】高铁氰化钾能使血红蛋白中的二价铁氧化成三价铁，形成高铁 血红蛋白()。后者再与氰离子结合，形成稳定的氰化高铁血红蛋白 (HiCN)。氰化高铁血红蛋白的最大吸收峰在波长540nm处，可用标准的高 精度的分光光度计定量测定，其吸光度与血红蛋白浓度成正比
1.红细胞增多 （1）相对性增多：如剧烈呕吐、严重腹泻、大面积烧伤、在汗、多尿 等，使体内水分丧失过多，导致血液浓缩。 （2）绝对性增多：多由于缺氧而致红细胞代偿增多，红细胞增多的程 度与缺氧程度成正比。少数病便是由造血系统疾病所致。 1）生理性增多：见于胎儿、新生儿、高原居民等。剧烈的体育运动、 体力劳动、情绪激动等红细胞也可一过性增多。 2）病理性增多：见于慢性心肺功能不全疾患，如肺气肿、肺源性心脏 病及某些发绀型先天性心脏病等。此外真性红细胞增多症时，红细胞增多 可达（7.0～10.0）×1012/L/ 2.红细胞增少 （1）生理性减少：见于妊娠中、晚期，血容量增加使血液稀释，红细 胞相对减少。 （2）病理性减少：是指血液中红细胞数量绝对减少。见于造血功能障 碍、造血原料供应不足，红细胞丢失和破坏过多等原因引起的各种贫血。 （二）血红蛋白测定（氰化高铁血红蛋白测定法） 【要求】熟悉氰化高铁血红蛋白测定方法，掌握血红蛋白测定的参考值 和临床意义。 【原理】高铁氰化钾能使血红蛋白中的二价铁氧化成三价铁，形成高铁 血红蛋白（Hi）。后者再与氰离子结合，形成稳定的氰化高铁血红蛋白 （HiCN）。氰化高铁血红蛋白的最大吸收峰在波长 540nm 处，可用标准的高 精度的分光光度计定量测定，其吸光度与血红蛋白浓度成正比