复旦大学：《药物分析》课程实验课件（仪器分析实验）荧光法测定硫酸奎宁溶液含量和四种物质的红外光谱测定

Experimental Principle 2)发射光谱(emission spectrum,即EM) 或称荧光光谱（fluorescence spectrum) 固定激发光波长和强度，而让荧光物质发射的荧光通过 发射单色器分光扫描以检测不同波长下的荧光强度，以发射 波长（em)为横坐标，荧光强度（F)为纵坐标作图，得 到物质的荧光光谱。 激发光谱和发射光谱可用于鉴别荧光物质；在定量时， 用于选择最适宜的激发波长。 复旦大学版权所有

Experimental Principle 2）发射光谱（emission spectrum，即EM） 或称荧光光谱（fluorescence spectrum） 固定激发光波长和强度，而让荧光物质发射的荧光通过 发射单色器分光扫描以检测不同波长下的荧光强度，以发射 波长（ λem ）为横坐标，荧光强度（ F）为纵坐标作图，得 到物质的荧光光谱。 激发光谱和发射光谱可用于鉴别荧光物质；在定量时， 用于选择最适宜的激发波长。 复旦大学版权所有 6

Experimental Principle 102 标准曲线法 1.配制不同浓度的对照品溶液(c),测定荧光强度（F,); 2.测定空白溶剂荧光强度(F。)； 3.做F(F,F。)~C关系曲线，线性回归； 4.测定样品荧光强度F,根据（F-Fo）,求得样品浓度c。 Fx 注意：固定仪器和测定条件； 试样浓度在线性范围内 Cx 复旦大学版权所有

Experimental Principle 标准曲线法 C F      CX FX 1. 配制不同浓度的对照品溶液（cs），测定荧光强度（Fs）； 2. 测定空白溶剂荧光强度（F0）； 3. 做F （ Fs - F0 ）～C关系曲线，线性回归； 4. 测定样品荧光强度Fx，根据（ Fx - F0 ） ，求得样品浓度cx。 注意：固定仪器和测定条件； 试样浓度在线性范围内 复旦大学版权所有 7

Procedures and methods 硫酸奎宁对照溶液 移液器吸取 (50.00μg/mL） 200、400、600、800、1000uL 25.00mL 硫酸奎宁样品溶液 量瓶 移液器吸取 150μL 1、光谱扫描和定量测定； 硫酸溶液 一定容 比色血 2、空白溶剂测定； 0.05moL/L 光路 3、对照溶液线性回归， 计算样品溶液含量； 复旦大学版权所有

Procedures and methods 硫酸奎宁对照溶液 （50.00g/mL） 移液器吸取 200、400、600、800、1000L 0.05moL/L 比色皿 光路 1、光谱扫描和定量测定； 2、空白溶剂测定； 3、对照溶液线性回归， 计算样品溶液含量； 25.00mL 量瓶 硫酸溶液 定容 硫酸奎宁样品溶液 移液器吸取 150L 复旦大学版权所有 8

Procedures and methods 日立F2500荧光分光光度计操作（请结合视频） 1、荧光光谱扫描 (1)发射光谱（EM) 可选取对照溶液的母液（或是稀 释溶液的浓度最大点)，设定激 发波长365nm,设定扫描范围 280-550nm,参数2.5nm狭缝宽度 550m 和PMT400,得到发射光谱， .em-max447-449nm。 复旦大学版权所有

Procedures and methods （1）发射光谱（ EM ） 可选取对照溶液的母液（或是稀 释溶液的浓度最大点），设定激 发波长365nm，设定扫描范围 280-550nm，参数2.5nm狭缝宽度 和PMT400，得到发射光谱， λem-max 447-449nm。 日立F2500荧光分光光度计操作（请结合视频） 1、荧光光谱扫描 复旦大学版权所有 9

Procedures and methods 1936 1、荧光光谱扫描 (2)激发光谱（即EX) 硫酸童宁(E 可选取对照溶液的母液（或是 稀释溶液的浓度最大点)，设 定发射波长447-449nm,设定扫 描范围280-450nm,参数狭缝宽 度2.5nm和PMT400,得到激发 00 光谱，ex-max313、343nm。 复旦大学版权所有

复旦大学版权所有 10 （2）激发光谱（即EX） 可选取对照溶液的母液（或是 稀释溶液的浓度最大点），设 定发射波长447-449nm，设定扫 描范围280-450nm，参数狭缝宽 度2.5nm和PMT400，得到激发 光谱， λex-max 313、343nm。 1、荧光光谱扫描