遗传学检测法 (一)载体表型选择法 2.β-半乳糖苷酶显色反应选择法 后酶使的分解成兰色产物
一、遗传学检测法 (一)载体表型选择法 2. -半乳糖苷酶显色反应选择法 -半乳糖苷酶使Xgal分解成兰色产物
遗传学检测法 -)根据插入基因的遗传性状的选择 利用插入的外源基因的表达产物特性 进行直接选择。(只在特定条件下) 1.原理 (1)弥补缺陷 转化进来的外源基因产物能够弥补受 体菌株的突变型缺陷。 受体菌:his 阳性克隆才能在不 含组氨酸的培养基 外源基因:his+ 中生长
一、遗传学检测法 (二)根据插入基因的遗传性状的选择 利用插入的外源基因的表达产物特性 进行直接选择。（只在特定条件下）。 1.原理 （1）弥补缺陷 转化进来的外源基因产物能够弥补受 体菌株的突变型缺陷。 hishis+ 受体菌： 外源基因： 阳性克隆才能在不 含组氨酸的培养基 中生长
遗传学检测法 (二)根据插入基因的遗传性状的选择 1.原理 (2)增加新性状 使被转化的受体菌表现出外源基因的表型 例:小鼠的二轻叶酸还原酶(DHFR)对三甲氧苄二氨 嘧啶有抗性 甲氧苄二氨嘧啶培养 DHFR 转化受 基平板 连接体菌 载体 含DHFR的克隆才能生长
一、遗传学检测法 (二)根据插入基因的遗传性状的选择 1.原理 （2）增加新性状 使被转化的受体菌表现出外源基因的表型。 例：小鼠的二轻叶酸还原酶（DHFR）对三甲氧苄二氨 嘧啶有抗性。 DHFR 载体 连接 转化受 体菌 三甲氧苄二氨嘧啶培养 基平板 含DHFR的克隆才能生长
二、物理检测法 利用有插入片段的重组载体的分子量 匕野生型载体分子量大。 (一)凝胶电泳检测法 从转化后的 菌体克隆中分离 质粒,电泳、比 较其分子量。 分子量载体 Marke克 隆
二、物理检测法 利用有插入片段的重组载体的分子量 比野生型载体分子量大。 (一)凝胶电泳检测法 从转化后的 菌体克隆中分离 质粒，电泳、比 较其分子量。 重 载体 组 克 隆 分子量 Marke r
二、物理检测法 二)酶切电泳筛选法 1.原理 根据已知的外源DNA序列的限制性酶切图 谱,选择一两种内切酶切割质粒,电泳后比较 电泳结果(DNA带数和长度) 或用合适的内切酶切下插入片断,再用其 它酶切这个片断,电泳后比较结果是否符合预 计的结果
二、物理检测法 (二)酶切电泳筛选法 1. 原理 根据已知的外源DNA序列的限制性酶切图 谱，选择一两种内切酶切割质粒，电泳后比较 电泳结果（DNA带数和长度）。 或用合适的内切酶切下插入片断，再用其 它酶切这个片断，电泳后比较结果是否符合预 计的结果