遗传学检测法 (一)载体表型选择法 1.抗药性标记及其插入失活选择法 pBR322选择过程 (1)四环素抗性插入失活 如果在et上插入外源DNA,导致四环素抗性基因失 活,可用四环素加环丝氨酸平板培养基选择重组克隆。 e失活的菌生长被四环素抑制,不被环丝氨酸杀死, 保留下来; Te不失活的菌抗四环素,能分裂生长,反而被环丝 氨酸杀死
一、遗传学检测法 (一)载体表型选择法 1.抗药性标记及其插入失活选择法 pBR322 选择过程 （1）四环素抗性插入失活 如果在Tetr上插入外源DNA，导致四环素抗性基因失 活，可用四环素加环丝氨酸平板培养基选择重组克隆。 Tetr失活的菌生长被四环素抑制，不被环丝氨酸杀死， 保留下来； Tetr不失活的菌抗四环素，能分裂生长，反而被环丝 氨酸杀死
遗传学检测法 四环素+环丝氨酸培养基 pBR322 氨苄青霉 素培养基 Cr 外源DA插入 四环素抗性基因 无环丝氨酸培养基
一、遗传学检测法 无环丝氨酸培养基
遗传学检测法 (一)载体表型选择法 1抗药性标记及其插入失活选择法 pBR322选择过程 (2)氨苄青霉素抗性插入失活选择过程 如果Amp上插入外源DNA,导致氨苄 四环素培养基 pBR322 加入碘-青霉素 指示液 外源DNA插入氨苄 青霉素抗性基因 挑选兰色克隆
一、遗传学检测法 (一)载体表型选择法 1.抗药性标记及其插入失活选择法 pBR322 选择过程 （2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程 如果Ampr上插入外源DNA，导致氨苄 青霉素抗性基因失活，可用碘-青霉素指示 液选择
遗传学检测法 )载体表型选择法 2_B-半乳糖苷酶显色反应选择法 乳糖 半乳糖 +葡萄糖 β-半乳糖苷酶 半乳糖+5溴4氯靛蓝 深蓝色 (1)原理 载体上有一段半乳糖苷酶基因(LacZ)的a片段(氨基 端),其上有外源DNA的插入位点。受体菌基因组中有突变的β 半乳糖苷酶基因(a片段缺失),可以被PTG诱导表达。载体和 受体菌基因组可以互补形成完整有功能的β-半乳糖苷酶
一、遗传学检测法 (一)载体表型选择法 2. -半乳糖苷酶显色反应选择法 -半乳糖苷酶 乳糖 半乳糖 葡萄糖 X-gal 半乳糖 + 5-溴-4-氯靛蓝 深蓝色 + （1）原理 载体上有一段-半乳糖苷酶基因（Lac Z）的片段（氨基 端），其上有外源DNA的插入位点。 受体菌基因组中有突变的- 半乳糖苷酶基因（ 片段缺失）, 可以被IPTG诱导表达。 载体和 受体菌基因组可以互补形成完整有功能的-半乳糖苷酶
遗传学检测法 (一)载体表型选择法 2.β-半乳糖苷酶显色反应选择法 Lacz 含Amp、Xgal、 a Lacz a IPTG的培养基 六 的a片段中插入外源M选白色克隆 载体B半乳糖苷酶基因 假阳性: 如果插入的外源DNA正好是3的倍数并且没有终止密码子 (不破坏α肽
一、遗传学检测法 (一)载体表型选择法 2. -半乳糖苷酶显色反应选择法 （2） 选择过程 假阳性： 如果插入的外源DNA正好是3的倍数并且没有终止密码子； （不破坏肽）