易错PCR 3 +5 90℃变性解链 3 5 与引1物退火，50℃ 35个9 5'ǜ3 3 第一次循环 引物及延伸，75℃ 3 3 90℃变性解链 进入第二次循环
易错PCR
>同序法(consensus approach) 对一组同源蛋白质的氨基酸序列进行比较，以一 定的标准程序计算出各氨基酸序列的共有序列； 人工合成同序基因后重组表达。 Martin Lehmann等(2000~2002)把这种方法应 用在真菌植酸酶家族设计合成了同序植酸酶基因 并表达出具热稳定性的同序植酸酶
➢同序法（consensus approach） ❖对一组同源蛋白质的氨基酸序列进行比较，以一 定的标准程序计算出各氨基酸序列的共有序列； ❖人工合成同序基因后重组表达。 Martin Lehmann等（2000～2002）把这种方法应 用在真菌植酸酶家族设计合成了同序植酸酶基因， 并表达出具热稳定性的同序植酸酶
54 10 Aspergiilus terreus 9n-1 OVLARHGARS PTHSKTKAYA ATIRAIOKSA TAPPGKYAFL OSYNYSLDSE 2. Aspergillus terreus cbs QVLARHGARS FTDSKTKAYA ATIAAIOKNA TALPGKYAFL KSYNYSMGSE 3 Aspergillus niger var. awamori QVLSRHGARY PTESKGKKYS ALTERICONV TTPDGKYAFL KTYNYSLGAD Aspergillus niger T213 OVLSRHGARY PTESKGKKYS ALIEEICONV TTFDGKYAFL KTYNYSLGAD 5, Aspergillus niger NRRL3135 QVLSRHGARY PTDSKGKKYS ALIERICONA TTFDGKYAPL KTYNYSLGAD 6 Aspergillus fumigatus 13073 OVLSRHGARY FTSSKSKKYK KLVTAIQANA TDPKGKFAFL KTYNYTLGAD 7, Aspergillus fumigatus 32722 QVLSRHGARY PTSSKSKKYK KLVTAIOANA TDFKGKPAFL KTYNYTLGAD Aspergillus fumigatus 58128 OVLSRHGARY FTSSKSXKYK KLVTAIQANA TDFKGKFAFL KTYNYTLGAD 9 Aspergillus fumigatus 26906 QVLSRHGARY PTSSKSKKYK KLVTAIOANA TDFKGKFAFL KTYNYTLGAD 10.Aspergillus fumigatus 32239 OVLSRHGARY PTASKSKKYK KLVTAIOKNA TEFKGKFAFL ETYNYTLGAD 11 Emericella nidulans QVLSRHGARY PTESKSKAYS GLIRATOKNA TSFWGOYAFL ESYNYTLGAD 12. Talaromyces thermophilus OLLSRHGARY PTSSXTELYS QLISRIQKTA TAYKGYYAFL KDYRYOLGAN 13.Myceliophthora thermophila QVLSRHGARA FTLKRAASYV DLIDRIHHGA ISYOPGYEPL RTYDYTLGAD Consensus QVLSRHGARY PTSSK-KAYS ALIEAIOKNA T-FKGKYAPL KTYNYTLGAD Consensun phytase-1 QVLSRHGARY PISSKSKAYS ALIEAIQKNA TAFKGKYAFL KTYNYTLGAD 14.Thermomyces lanuginosus QVLSRHGARY PTAHKSEVYA ELLORIQDTA TEFKGDFAFL RDYAYHLGAD s involutus (phyAl) NIIORHGARP PTEGATTRIK AGLTKLOGVQ NPTDAKPNFI KSFKYDLGNS 16. Paxillus involutus (phyA2) NIIORHGARP PTSGAATRIK AGLSKLOSVO NFTDPKPDPI KSFTYDLGTS 17. Trametes pubescens HIIORHGARP PTSGAAKRIO TAVAKLKAAS NYTDPLLAPV TNYTYSLGQD 1B. Agrocybe pediades NIIQRHGARP PTSGAGTRIQ AAVKKLOSAK TYTDPRLDFL TNYTYTLGHD 19. Fenicphora lycii NLIORHGARW PTSGARSROV AAVAKIQHAR PPTDPKYEFL NDFVYKPGVA 20. Conbasidio phytase NIIQRHGARF PTSGAATRIQ AAVAKLOSA- -TDPKLDFL -N-TY-LG-D Consensus QVLSRHGARY PTSSKSKKYS ALI-AIQKNA T-FRGKYAFL KTYNYTLGAD Consensua phytase-10 QVLBRHCARY PTSSKSKKYS ALIEAIQKNA TAFKGKYAFL KTYNYTLGAD Consengus phytaso-11 QVLSRHGARY PTSSKSKKYS ALIERIOKNA T-FKGKYAFL KTYNYTLGAD 真菌植酸酶aa序列的同序比较
真菌植酸酶aa序列的同序比较
udiof stabizing Consensus phytase-10-thermof5] efuiwation of dereid Consensus phytase-10-thermo[3] IAtroduction of 3 Consensus phytase-1-thermof1I] -Tenin by wa概 Consensus phytase-10 minanin of sile-dee年kl h时 85 3destahiling mulatorests- Consensus phytase-1-thermo[8] Mnrodvcnon of &出g Inclusion of6 additioal M信 80 sequences in the alignmeat yielded 32amto cid changes Consensus phytase- 75 70 65 Tm-54.5-67.0 C:range of wild-type fungal phytases 60 同序植酸酶-1的最适温度为71℃，而亲代植酸酶的最适温 度为45-55℃，增加了16-26℃，同序植酸酶-1Tm为78℃，比亲代 55 植酸酶增加了15-22℃，而催化性质与大多数亲本植酸酶相似
同序植酸酶-1的最适温度为71℃，而亲代植酸酶的最适温 度为45-55℃，增加了16-26℃, 同序植酸酶-1Tm为78℃，比亲代 植酸酶增加了15-22℃，而催化性质与大多数亲本植酸酶相似
DNA Shuffling 必外显子、单基因和基因家族的重组装 随机引物延伸法 交错延伸法 >随机片段活体突变 线状基因和随机片段共转化酵母细胞
➢DNA Shuffling: ❖外显子、单基因和基因家族的重组装 ❖随机引物延伸法 ❖交错延伸法 ➢随机片段活体突变: 线状基因和随机片段共转化酵母细胞