TLP-ste突变蛋白的三维结构
TLP-ste突变蛋白的三维结构
酶拓扑结构的变化 H Glu 20a
酶拓扑结构的变化
基因直接进化的步骤 >突变 基因突变库的建立 产筛选 基因突变库的活体或离体 >基因复制与遗传
基因直接进化的步骤 ➢突变 基因突变库的建立 ➢筛选 基因突变库的活体或离体筛选 ➢基因复制与遗传
建立基因突变库的方法 >定向诱变： 点突变—碱基删除、增补和替换 随机诱变： 易错PCR法(Error-prone PCR) 降低一种dNTP的量（降至5%-10%） 加入dTP来代替被减少的dNTP 缓冲液中另加0.5mmol/LMn+
建立基因突变库的方法 ➢定向诱变： 点突变——碱基删除、增补和替换 ➢随机诱变： 易错PCR法(Error-prone PCR)—— ❖ 降低一种dNTP的量（降至5％-10％） ❖ 加入dITP来代替被减少的dNTP ❖ 缓冲液中另加0.5mmol/L Mn2+
(a)Oligonucleotide-directed mutagenesis ()Base-pair substitution Oligo binds to ssDNA Polymerization Replication in cell Oligo- SSDNA A (间Insertion (iii)Deletion (b)Cassette replacement (c)Deletion (d)Sets of deletions (e)PCR mutagenesis ·1 st PCR to obtain long primer Product■T ·2 nd PCR using long primer Product ■