逆转录的反应体系1、模板RNA2、逆转录酶3、逆转录引物
逆转录的反应体系 1、模板RNA 2、逆转录酶 3、逆转录引物
逆转录引物:(1)随机六聚核苷酸引物仅长6个核苷酸,每个核苷酸位点上随机加入4种不同的脱氧核苷酸,因此是46种不同引物的集合体。所有RNA分子均可以充当模板,合成的cDNA中有96%来自rRNA。随机引物AAAAAAA(A)3NN,N2N,AAAAAAA(A)2N.NN2AAAAAAA(A)I2-NN2
(1)随机六聚核苷酸引物 仅长6个核苷酸,每个核苷酸位点上随机加入4种不同 的脱氧核苷酸,因此是46种不同引物的集合体。 所有RNA分子均可以充当模板,合成的cDNA中有 96%来自rRNA。 逆转录引物:
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逆转录引物:(2) Oligo (dT )仅由dTTP构成,长度一般为18-24个核苷酸识别mRNA的3'端poly(A)尾,因此仅mRNA可被逆转录oligo(dT)AAAAAAA(A)3TTTTTTTTAAAAAAA(A)TTTTTTTTAAAAAAA(A))管
(2)Oligo(dT) 仅由dTTP构成,长度一般为18-24个核苷酸。 识别mRNA的3’端poly(A)尾,因此仅 mRNA可被逆转录。 逆转录引物:
逆转录引物:(3)特异性引物能与目标RNA碱基序列互补的寡核苷酸引物,仅产生待分析基因的cDNA。特异性引物AAAAAAA(A)AAAAAAA(A)2GSPAAAAAAA(A)
(3)特异性引物 能与目标RNA碱基序列互补的寡核苷酸引物, 仅产生待分析基因的cDNA。 逆转录引物: