酶法分离原生质体的影响因素 (①)培养基组成 (2)菌体培养方式 (3)菌体菌龄 (4)稳定剂 (⑤)酶解前的预处理 (6酶系和酶的浓度 (7)酶的作用温度和作用pH值 (⑧)菌体密度 (9)酶解方式 2025/4/6 16
2025/4/6 16 酶法分离原生质体的影响因素 (1)培养基组成 (2)菌体培养方式 (3)菌体菌龄 (4)稳定剂 (5)酶解前的预处理 (6)酶系和酶的浓度 (7)酶的作用温度和作用pH值 (8)菌体密度 (9)酶解方式
2.原生质体的鉴定 (1)低渗爆破法：直接在显微镜下观察原生质体在低渗溶 液中吸水膨胀、破裂的过程。 细胞壁去除完全的原生质体吸水破裂后细胞彻底解体，没 有残骸；如果原生质体破壁不完全，还有部分剩余细胞壁 则原生质体从无细胞壁处吸水，膨胀破裂并留下一个残存 的细胞形态；对于那些正常细胞或酶解程度不彻底的细胞 吸水后由于细胞壁的保护作用，不会胀裂，能维持正常形 态。 2025/4/6
2025/4/6 17 2．原生质体的鉴定 (1)低渗爆破法：直接在显微镜下观察原生质体在低渗溶 液中吸水膨胀、破裂的过程。 细胞壁去除完全的原生质体吸水破裂后细胞彻底解体，没 有残骸；如果原生质体破壁不完全，还有部分剩余细胞壁， 则原生质体从无细胞壁处吸水，膨胀破裂并留下一个残存 的细胞形态；对于那些正常细胞或酶解程度不彻底的细胞， 吸水后由于细胞壁的保护作用，不会胀裂，能维持正常形 态
(2)荧光染色法：原生质体混悬液用0：05%一0.1 %的荧光增白剂染色，离心弃染料、洗涤后在荧 光显微镜下观察（波长用360一440nm),如发出红 色光则为完全原生质体，如发出绿色光则表明还 有细胞壁成分存在。 2025/4/6 18
2025/4/6 18 (2)荧光染色法：原生质体混悬液用0.05％－0.1 ％的荧光增白剂染色，离心弃染料、洗涤后在荧 光显微镜下观察(波长用360－440nm)，如发出红 色光则为完全原生质体，如发出绿色光则表明还 有细胞壁成分存在