直接亲本及其遗传标记的选择 一般把诱变中筛选获得的不同”正突变 株”作为直接亲本进行融合，通过交换、重组 使优良性状集中于重组体中，以加快育种速度。 原生质体融合的亲本应采用具有较大遗 传差异的近亲菌株，重组后的新个体具有更大 的杂种优势。 2025/4/6 11
2025/4/6 11 一、直接亲本及其遗传标记的选择 一般把诱变中筛选获得的不同“正突变 株”作为直接亲本进行融合，通过交换、重组， 使优良性状集中于重组体中，以加快育种速度。 原生质体融合的亲本应采用具有较大遗 传差异的近亲菌株，重组后的新个体具有更大 的杂种优势
1.如果目的是为了进行遗传分析，应该采用带隐 性基因的营养缺陷型菌株或抗性菌株。 2.如果从育种角度进行原生质体融合，由于多数 营养缺陷型菌株都会影响代谢产物的产量（尤其对 些抗生素产生菌)，选择营养标记时，应尽量避 免采用对正常代谢有影响的营养缺陷型。 2025/4/6 12
2025/4/6 12 1. 如果目的是为了进行遗传分析，应该采用带隐 性基因的营养缺陷型菌株或抗性菌株。 2. 如果从育种角度进行原生质体融合，由于多数 营养缺陷型菌株都会影响代谢产物的产量(尤其对 一些抗生素产生菌)，选择营养标记时，应尽量避 免采用对正常代谢有影响的营养缺陷型
3.采用灭活标记。把双亲中任何一方的原生质体 用热灭活（如50℃2h或60℃5min)或用紫外线、 药物灭活，使细胞内的某些酶或代谢途径钝化， 然后和另一方具有正常活性的原生质体融合而获 得重组体。前者为供体，后者为受体，这样可以 省去营养缺陷型的遗传标记。 采用灭活标记融合频率较低，但重组体产量较高。 2025/4/6 13
2025/4/6 13 3. 采用灭活标记。把双亲中任何一方的原生质体 用热灭活(如50℃ 2h 或60℃ 5min)或用紫外线、 药物灭活，使细胞内的某些酶或代谢途径钝化， 然后和另一方具有正常活性的原生质体融合而获 得重组体。前者为供体，后者为受体，这样可以 省去营养缺陷型的遗传标记。 采用灭活标记融合频率较低，但重组体产量较高
原生质体制备与再生 (一)原生质体制备 活性原生质体制备过程包括原生质体的分离、收集、 纯化、活性鉴定和保存等操作步骤。 细胞去壁后，原生质体从中释放出来，此过程为原生 质体分离。 去壁的方法有三种：机械法、非酶分离法和酶法。 2025/4/6 14
2025/4/6 14 二、原生质体制备与再生 （一）原生质体制备 活性原生质体制备过程包括原生质体的分离、收集、 纯化、活性鉴定和保存等操作步骤。 细胞去壁后，原生质体从中释放出来，此过程为原生 质体分离。 去壁的方法有三种：机械法、非酶分离法和酶法
1.酶法分离原生质体 取年轻的菌体转入到高渗溶液中，加入有关 水解酶，在一定条件下酶解细胞壁。 注意：不同的微生物选择不同的酶。 细菌、放线菌：溶菌酶 真菌的细胞壁成分 真菌：蜗牛酶、纤维素酶、 种类 纤维素几丁质其它多糖 疫霉属 25 0 65 毛霉属 0 9 44 酵母属 0 1 60 镰刀菌属 0 39 29 裂褶菌属 0 5 81 2025/4/6 鬼伞属 0 33 50
2025/4/6 15 1. 酶法分离原生质体 取年轻的菌体转入到高渗溶液中，加入有关 水解酶，在一定条件下酶解细胞壁。 注意：不同的微生物选择不同的酶。 细菌、放线菌：溶菌酶 真菌：蜗牛酶、纤维素酶、葡聚糖酶