第三章 细胞生物学实验技术 METHODS AND TECHNIQUES
第三章 细胞生物学实验技术 METHODS AND TECHNIQUES
第二节 生物化学与分子生物 学技术
第二节 生物化学与分子生物 学技术
➢ 组织化学和细胞化学染色方法（histochemical and cytochemical staining method）用于对某些细胞成分 进行定性和定位研究。 ➢ （一）固定 1. 物理固定：血膜空气快速干燥、冷冻干燥。 2. 化学固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和锇酸 等试剂。显示多糖常用乙醇固定，显示酶类多用甲醛丙 酮缓冲液固定。 一、细胞化学技术
➢ 组织化学和细胞化学染色方法（histochemical and cytochemical staining method）用于对某些细胞成分 进行定性和定位研究。 ➢ （一）固定 1. 物理固定：血膜空气快速干燥、冷冻干燥。 2. 化学固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和锇酸 等试剂。显示多糖常用乙醇固定，显示酶类多用甲醛丙 酮缓冲液固定。 一、细胞化学技术
（二）显示方法 1. 金属沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反应产物最 终生成CoS或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。 2. Schiff反应：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品 红变为红色。用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen反 应）。 3. 联苯胺反应：过氧化酶分解H202。产生新生氧，后者再 将无色联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化合物。 4. 脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。 5. 茚三酮反应：显示蛋白质
（二）显示方法 1. 金属沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反应产物最 终生成CoS或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。 2. Schiff反应：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品 红变为红色。用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen反 应）。 3. 联苯胺反应：过氧化酶分解H202。产生新生氧，后者再 将无色联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化合物。 4. 脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。 5. 茚三酮反应：显示蛋白质
二、免疫细胞化学 immunocytochemistry ➢ 概念：根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行 定位测定的技术。常用的标记物有荧光素和酶。 ➢ 免疫荧光法（immunofluorescent technique）：常用的萤光素有异 硫氰酸荧光素、罗丹明等。 ➢ 酶标免疫法（enzyme-labeled antibody method）：常用的酶有辣 根过氧化物酶，酶与底物发生反应后形成不透明的沉积物，从而显示 出抗原存在的部位
二、免疫细胞化学 immunocytochemistry ➢ 概念：根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行 定位测定的技术。常用的标记物有荧光素和酶。 ➢ 免疫荧光法（immunofluorescent technique）：常用的萤光素有异 硫氰酸荧光素、罗丹明等。 ➢ 酶标免疫法（enzyme-labeled antibody method）：常用的酶有辣 根过氧化物酶，酶与底物发生反应后形成不透明的沉积物，从而显示 出抗原存在的部位