核酸的鉴定背景知识核酸完整性检测核酸样本的完整性和分子量可通过琼脂糖凝胶电泳测定（RNA常采用甲醛琼脂糖变性凝胶电泳），溴化乙锭染色，紫外灯观察。凝胶上DNA存在处可观察到清晰的条带。完整性良好的总RNA应该清晰地看到28srRNA、18srRNA、5srRNA的三条带，其中28srRNA的亮度应为18srRNA的两倍，5srRNA较弱
核酸完整性检测 核酸样本的完整性和分子量可通过琼脂糖凝胶电泳测定 （RNA常采用甲醛琼脂糖变性凝胶电泳），溴化乙锭染色， 紫外灯观察。 凝胶上DNA存在处可观察到清晰的条带。完整性良好的总 RNA应该清晰地看到28s rRNA、18s rRNA、5s rRNA的三条 带，其中28s rRNA的亮度应为18s rRNA的两倍，5s rRNA 较弱。 背景知识 核酸的鉴定
DNA纯化基本原理实验原理苯酚抽提法苯酚作为蛋白变性剂，可同时抑制DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶，蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相。利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此法的特点是可使提取的DNA保持天然状态
实验原理 DNA纯化基本原理 苯酚抽提法 苯酚作为蛋白变性剂，可同时抑制DNase的降解作用。 用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与 DNA 联结键已断，蛋白分子 表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶，蛋白分子溶于酚相， 而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并 含DNA 的水相。利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。 此法的特点是可使提取的DNA保持天然状态
实验原理紫外分光光度法测定DNA的纯度和浓度原理DNA或RNA链上碱基的苯环结构（共轭双键）在紫外光区具有较强的吸收，其吸收峰在260nm处。当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染时，会影响DNA吸收光的准确测定。蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。因此，一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230计算其比值来衡量样品的纯度。心浓度的计算1 OD260 = 50 μg/mL dsDNA1 OD260 = 40 μg/mL ssDNA/RNA*纯度的计算DNA纯品的OD260/OD280约为1.8，OD260/OD230≥2.0OD260/OD280>1.8说明含有RNA污染；OD260/OD280<1.6说明有残余的蛋白质、酚等存在；OD260/OD230<2.0说明盐和小分子污染
紫外分光光度法—测定DNA的纯度和浓度 原理 DNA或RNA链上碱基的苯环结构（共轭双键）在紫外光区具有较强的 吸收，其吸收峰在260 nm处。当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分 子污染时，会影响DNA吸收光的准确测定。蛋白质在280 nm处有最大的 吸收峰，盐和小分子则集中在230 nm处。因此，一般情况下同时检测同 一样品的OD260、OD280 和OD230计算其比值来衡量样品的纯度。 浓度的计算 1 OD260 = 50 μg/mL dsDNA 1 OD260 = 40 μg/mL ssDNA/RNA 纯度的计算 DNA纯品的OD260/OD280 约为1.8， OD260/OD230 ≥2.0 OD260/OD280＞1.8说明含有RNA污染； OD260/OD280＜1.6 说明有残余的蛋白质、酚等存在； OD260/OD230＜2.0 说明盐和小分子污染。 实验原理
琼脂糖凝胶电泳法实验原理分离鉴定核酸的常规方法原理琼脂糖凝胶电泳主要是应用琼脂糖凝胶作为支持物的电泳法，借助琼脂凝胶分子筛作用，核酸片段因其分子量或者分子形状不同，电泳速度有差异而分离。这种技术是基因操作的一种方法。核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液中，其碱基不解离，而磷酸基团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。带负电粒正极负极带正电粒子结果观察制备凝胶时先加入少量荧光染料（EB），其分子可插入双链DNA的碱基对之间，可在紫外灯下直接观察到DNA片段在凝胶上的位置（红色荧光条带），也可在经凝胶成像系统中直接拍照
实验原理 琼脂糖凝胶电泳法—分离鉴定核酸的常规方法 原理 琼脂糖凝胶电泳主要是应用琼脂糖凝胶作为支持物的电泳法，借助 琼脂凝胶分子筛作用，核酸片段因其分子量或者分子形状不同，电泳速 度有差异而分离。这种技术是基因操作的一种方法。 核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液中，其碱 基不解离，而磷酸基团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正 极迁移。 结果观察 制备凝胶时先加入少量荧光染料（EB），其分子可插入双链DNA的 碱基对之间，可在紫外灯下直接观察到DNA片段在凝胶上的位置（红色 荧光条带），也可在经凝胶成像系统中直接拍照
琼脂糖凝胶电泳（1）可分瓣的核酸分子的大小范围50 ~ 30.000 bp琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分瓣范围琼脂糖凝胶浓度线形DNA的最佳分辨范围（bp）0.5%1,000~30.0000.7%800 ~12,0001.0%500~10,0001.2%400~7,0001.5%200 ~ 3,0002.0%50 ~2,000
(1) 可分辨的核酸分子的大小范围： 50 ～ 30,000 bp 琼脂糖凝胶浓度 线形DNA的最佳分辨范围（bp） 0.5% 1,000～30,000 0.7% 800 ～12,000 1.0% 500 ～10,000 1.2% 400 ～7,000 1.5% 200 ～3,000 2.0% 50 ～2,000 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 琼脂糖凝胶电泳