DNA的纯化及鉴定
DNA的纯化及鉴定
核酸的纯度与质量背景知识获得高质量核酸的重要性：DNA分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交和基因的表达，获得高纯度、高质量的DNA是非常重要的前提*核酸的纯化：根据所需核酸的性质和特点除去其它核酸污染，并除去提取过程中的系列试剂(盐、有机溶剂等）杂质，最后得到均一的核酸样品、核酸的鉴定：浓度、纯度、完整性
核酸的纯度与质量 获得高质量核酸的重要性：DNA分子生物学研究的 主要对象，为了进行测序、杂交和基因的表达，获 得高纯度、高质量的DNA是非常重要的前提。 核酸的纯化：根据所需核酸的性质和特点除去其它 核酸污染，并除去提取过程中的系列试剂(盐、有机 溶剂等）杂质，最后得到均一的核酸样品。 核酸的鉴定：浓度、纯度、完整性 背景知识
核酸纯化应达到的要求背景知识核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；其它生物大分子的污染应降低到最低程度；排除其它核酸分子的污染
核酸纯化应达到的要求 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高 浓度的金属离子； 其它生物大分子的污染应降低到最低程度； 排除其它核酸分子的污染。 背景知识
核酸的鉴定背景知识核酸浓度检测定磷法DNA和RNA中都含有磷酸，根据元素分析获知RNA的平均含磷量为9.4%，DNA的平均含磷量为9.9%，因此可从样品中测得的含磷量来计算DNA或RNA的含量。·定糖法RNA含核糖，DNA含有脱氧核糖，根据这两种糖的颜色反应可对DNA和RNA进行定量测定。紫外吸收法核酸紫外吸收峰位于260nm处，测定OD260值可以计算核酸浓度。A260=1时，样品中双链DNA浓度为50μg/ml，单链DNA或RNA浓度为40μg/ml。DNA（μg/μl）=A260×50×稀释倍数/1000RNA（μg/μl)=A260×40×稀释倍数/1000
核酸浓度检测 定磷法 DNA和RNA中都含有磷酸，根据元素分析获知RNA的平均含磷 量为9.4%，DNA的平均含磷量为9.9%，因此可从样品中测得的 含磷量来计算DNA或RNA的含量。 定糖法 RNA含核糖，DNA含有脱氧核糖，根据这两种糖的颜色反应可对 DNA和RNA进行定量测定。 紫外吸收法 核酸紫外吸收峰位于260 nm处，测定OD260值可以计算核酸浓度。 A260 ＝1时，样品中双链DNA浓度为50 μg/ml，单链DNA或RNA浓度为40 μg/ml。 DNA (μg/μl) = A260×50×稀释倍数/1000 RNA (μg/μl)= A260×40×稀释倍数 /1000 背景知识 核酸的鉴定
核酸的鉴定背景知识核酸纯度的检测核酸的纯度用A260/A280比值表示OD260 / OD280 = 1.8为DNA纯品OD260 / OD280 = 1.8~2.0-为RNA纯品
核酸纯度的检测 核酸的纯度用A260/A280比值表示。 OD260 / OD280 ＝1.8 ——为DNA纯品 OD260 / OD280 ＝1.8~2.0 ——为RNA纯品 背景知识 核酸的鉴定