实验八脂质体介导的细胞转染实验
脂质体介导的细胞转染实验 实验八 1
废门大王XiamenUniversity常用的哺乳动物细胞基因转移方法一
常用的哺乳动物细胞基因转移方法 2
常用的重组蛋白表达系统酵母细胞大肠杆菌昆虫细胞哺乳动物细胞0-1%0-60%0-10%0-30%产率（以干重计算）++蛋白酶消化糖基化分泌+-折叠+-+磷酸化酰基化酰胺化3
大肠杆菌 酵母细胞 昆虫细胞 哺乳动物细胞 产率（以干重计算） 0-60% 0-10% 0-30％ 0-1% 蛋白酶消化 +/- +/- + + 糖基化 - + + + 分泌 +/- + + + 折叠 +/- +/- + + 磷酸化 - + + + 酰基化 - + + + 酰胺化 - - + + 常用的重组蛋白表达系统 3
常用的基因转移方法RetroviralVectorAdenoviralVectorNonviral VectorDNACapsidEnvelopeLipPlasmidReverseTranscriptase非病毒载体RNADNAGenomeGenome（化学或物理方法）CellMembrane脂质体转染Receptoocepto磷酸钙转染电穿孔技术Endosome显微注射+山TherapeuticProtein.福病毒载体RibosomeRNADNA整合型病毒载体NuclearRNaseHMembeane非整合型病毒载体(dinsolved)DNATherapeutieHost-CellTherapeuticNuclearGeneGeneGenomemRNAPoreTherapeuticGene
常用的基因转移方法 非病毒载体 (化学或物理方法) 脂质体转染 磷酸钙转染 电穿孔技术 显微注射 。 病毒载体 整合型病毒载体 非整合型病毒载体 4
外源基因在细胞中的表达方式瞬时表达稳定表达获得稳定表达外源基因目的快速分析的细胞克隆整合未整合外源DNA存在状态随宿主细胞本身基因组随细胞分裂而稀释至丢表达维持时间失，一般可表达一样复制，转录，翻译48~72小时并被稳定遗传筛选办法抗生素抗性抗生素抗性5
瞬时表达 稳定表达 目的 快速分析 获得稳定表达外源基因 的细胞克隆 外源DNA存在状态 未整合 整合 表达维持时间 随细胞分裂而稀释至丢 失，一般可表达 48～72小时 随宿主细胞本身基因组 一样复制，转录，翻译， 并被稳定遗传 筛选办法 抗生素抗性 抗生素抗性 外源基因在细胞中的表达方式 5