主要方法·根据蛋白质元素组成一一凯氏定氮法;·根据蛋白质组成特点建立的比色法一一双缩脲法,lowry改良法,考马斯亮蓝染色法,BCA法;·根据蛋白质的吸收特性建立的紫外分光光度法:H.ANHH-N180°℃Cu2IHH+NH3JHH.H,NNHNHH,NUreaCopper ComplexBiuret
主要方法 • 根据蛋白质元素组成——凯氏定氮法; • 根据蛋白质组成特点建立的比色法——双缩脲法,lowry 改良法,考马斯亮蓝染色法,BCA法; • 根据蛋白质的吸收特性建立的紫外分光光度法;
BCA(二喹啉甲酸)法(P71)BCA与CuSO等组成苹果绿色的BCA工作液,在碱性条件下,BCA与蛋白结合原理时,将Cu2+还原成Cu+,一个Cu+螯合两个BCA分子,呈现紫色复合物,颜色深浅与蛋白质浓度成正比测定测定蛋白质范围:20-200μg/ml范围选用562nm波长操作简便,准确灵敏,稳定性好,节约样品和试剂用量,抗干优点扰能力强
BCA(二喹啉甲酸)法(P71) BCA与CuSO4等组成苹果绿色的BCA工作液,在碱性条件下,BCA与蛋白结合 时,将Cu2+还原成Cu+,一个Cu+螯合两个BCA分子,呈现紫色复合物,颜色 深浅与蛋白质浓度成正比。 原理 测定蛋白质范围:20-200mg/ml 测定 范围 选用 562nm 波长 操作简便,准确灵敏,稳定性好,节约样品和试剂用量,抗干 扰能力强 优点