实验五植物细胞液泡系与细胞骨架的染色与观察
实验五 植物细胞液泡系与 细胞骨架的染色与观察
一、相关概念与原理1植物细胞与动物细胞区别植物细胞：细胞壁、叶绿体、大液泡动物细胞：中心体2细胞骨架指真核细胞中的蛋白纤维网架体系，是由微管、微丝和中间纤维组成的体系功能：维持细胞的一定形态；细胞内物质运输和细胞器的移动；帮助细胞运动；指导细胞壁合成等
一、相关概念与原理 1 植物细胞与动物细胞区别 植物细胞：细胞壁、叶绿体、大液泡 动物细胞：中心体 2 细胞骨架 指真核细胞中的蛋白纤维网架体系，是由微管、微丝和 中间纤维组成的体系。 功能：维持细胞的一定形态；细胞内物质运输和细胞器 的移动；帮助细胞运动；指导细胞壁合成等
3细胞骨架染色用TritonX-100处理细胞，抽提掉细胞质内结合在膜结构上的蛋白质，而骨架蛋白得以保存戊二醛固定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后，可以在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。4液泡系染色中性红是一种弱碱性pH指示剂，pH6.4~8.0时，由红变黄。中性或弱碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红到液泡中；液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色田胞核与细胞质不着色
3 细胞骨架染色 用Triton X-100处理细胞，抽提掉细胞质内结合在膜结构 上的蛋白质，而骨架蛋白得以保存。 戊二醛固定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后，可 以在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。 4 液泡系染色 中性红是一种弱碱性 pH 指示剂，pH6.4～8.0时，由红变 黄。 中性或弱碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红到 液泡中；液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，中性红便解离 出大量阳离子而呈现樱桃红色。 细胞核与细胞质不着色
二、材料、试剂与器械·实验材料洋葱绿豆芽胚轴胚根·试剂Ringer溶液、M-缓冲液、磷酸缓冲液（PBS）1%Triton X-100、10%中性红溶液、0.2%考马斯亮蓝R250、3%戊二醛·器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面血、吸管（1根/人）、吸水纸
• 实验材料 绿豆芽 洋葱 • 试剂 Ringer溶液、 M－缓冲液、磷酸缓冲液（PBS）、 1%Triton X-100、 10%中性红溶液 、 0.2%考马斯亮蓝 R250、3%戊二醛 • 器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、 解剖盘、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、 吸管（1根/人）、吸水纸 二、材料、试剂与器械
三、实验步骤1植物活细胞内液泡系的染色和观察（1）豆苗培养实验前把绿豆培养在培养血内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根伸长到1cm以上。（2）染色用刀片把绿豆幼苗根尖切一纵切面，放于载玻片上，滴一滴1/3000中性红染液，染色8-10min。（3）制片吸去染液，滴1滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察（4）镜检
（1）豆苗培养 实验前把绿豆培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽， 胚根伸长到1cm以上。 （2）染色 用刀片把绿豆幼苗根尖切一纵切面，放于载玻片上，滴一 滴1/3000中性红染液，染色8-10min。 （3）制片 吸去染液，滴1滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻 地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。 （4）镜检 三、实验步骤 1 植物活细胞内液泡系的染色和观察