申请代码 C030306 受理部门 收件日期: 受理编号 解除保护 国家自然科学基金 申请书 资助类别:面上项目 亚类说明:地区科学基金项目 附注说明: 项目名称:广西平果、大化两县壮族儿童原发性肾病综合征相关基因表达 谱的绘制 申请者:刘运广 电话:0776-2848023 依托单位:右江民族医学院 通讯地址:广西百色市城乡路98号 邮政编码:533000 单位电话:0776-2846532 电子邮件:lyg92260163.com 申报日期: 200年3月20日 国家自然科学基金委员会
申请代码： C030306 受理部门： 收件日期： 受理编号： 解除保护 国家自然科学基金 申 请 书 资助类别：面上项目 亚类说明：地区科学基金项目 附注说明： 项目名称：广西平果、大化两县壮族儿童原发性肾病综合征相关基因表达 谱的绘制 申 请 者：刘运广 电话： 0776-2848023 依托单位：右江民族医学院 通讯地址：广西百色市城乡路 98 号 邮政编码：533000 单位电话：0776-2846532 电子邮件：lyg9226@163.com 申报日期： 2004 年 3 月 20 日 国家自然科学基金委员会
国家自然科学基金申请书 基本信息 姓名刘运广 性别|男年月192年7月民族汉族 申请者 位硕士 职称教授 主要研究领域|小儿肾脏疾病 话|0776-2848023 电子邮件1yg92260163.com 真0776-2848653 个人网页 信 息工作单位右江民族医学院 在研项目批准号 名称有江民族医学院 代码5330001 位 联系人梁丽艳 电子邮件yehxwgf229@sina.com 信息一合作单位 电话|07762846532 网站地址Ihttp://www.ymcn.gx.cn 单位名称 代码 单中南大学 41008301 信「[在此录入修改 项目名称西平果、大化两县壮族儿童原发性肾病综合征相关基因表达谱的绘制 项目基本 资助类别面上项目 亚类说明地区科学基金项目 附注说明 申请代码c030306:儿科学 信 基地类别 惠[预计研究年限2051年1月-20701月研究属性基础研究 申请经费25.5000万元 项目研究内容和意义简介(限400字):利用基因芯片技术检测广西平果、大化两县壮族儿 童原发性肾病综合征(PNS)外周血单个核细胞(PBMC)及肾组织基因表达谱的变化,观察 摘其与正常壮族儿童及不同地区汉族PS儿童基因表达谱的差异,探讨壮族儿童PS致病相 关基因在PNS发生、发展、病理改变以及对激素的治疗反应中的作用。为建立肾脏相关基 因表达数据库和绘制肾脏相关基因作用通路或网图进一步寻找各种病理条件下的基因标志 提供资料,并为探讨在PNS发生发展中起关键作用的基因予以特异性治疗提供理论依据。 关键词(用分号分开,最多5个)原发性肾病综合征:儿童:壮族:;基因芯片:汉族 版本1014348
国家自然科学基金申请书 第 2 页 版本 1.014.348 基本信息 yoKWT/OQ 申 请 者 信 息 姓 名 刘运广 xingming 性别 男 出生 年月 1962 年 7 月 民 族 汉族 学 位 硕士 职称 教授 主要研究领域 小儿肾脏疾病 电 话 0776-2848023 电子邮件 lyg9226@163.com 传 真 0776-2848653 个 人 网 页 工 作 单 位 右江民族医学院 在研项目批准号 依 托 单 位 信 息 名 称 右江民族医学院 代 码 53300001 联 系 人 梁丽艳 电子邮件 yehxwgf2229@sina.com 电 话 0776-2846532 网站地址 http://www.ymcn.gx.cn 合 作 单 位 信 息 单 位 名 称 代 码 中南大学 41008301 [在此录入修改] 项 目 基 本 信 息 项目名称 广西平果、大化两县壮族儿童原发性肾病综合征相关基因表达谱的绘制 资助类别 面上项目 亚 类 说 明 地区科学基金项目 附注说明 申请代码 C030306:儿科学 基地类别 预计研究年限 2005 年 1 月 — 2007 年 12 月 研究属性 基础研究 申请经费 25.5000 万元 摘 要 项目研究内容和意义简介（限 400 字）：利用基因芯片技术检测广西平果、大化两县壮族儿 童原发性肾病综合征（PNS）外周血单个核细胞（PBMC）及肾组织基因表达谱的变化，观察 其与正常壮族儿童及不同地区汉族 PNS 儿童基因表达谱的差异，探讨壮族儿童 PNS 致病相 关基因在 PNS 发生、发展、病理改变以及对激素的治疗反应中的作用。为建立肾脏相关基 因表达数据库和绘制肾脏相关基因作用通路或网图进一步寻找各种病理条件下的基因标志 提供资料，并为探讨在 PNS 发生发展中起关键作用的基因予以特异性治疗提供理论依据。 关 键 词(用分号分开，最多 5 个) 原发性肾病综合征；儿童；壮族；基因芯片；汉族
国家自然科学基金申请书 项目组主要成员(杰出青年科学基金不填此栏 出生年月性别职称学位 单位名称 电话 电子邮件 项目分工作时间 (月) 黄瑞雅 1951-1-25男|教授 学士右江民族医学院 077284819216cm 参与课题设 计实验测试 张建江 19男博土生学中南太学22(y8 3林娜 1969-12-12女主治医师硕士右江民族医学院 lyg92260163.com 收集标本 耿文茂 1978-10- 男硕士生学士中南大学 5陈霞静 1966-10-8女主治医师学士右江民族医学院 0776-28371y89226163.com 收集标本 6黄月艳 1970-2-26女主治医师硕士右江民族医学院 0776-283671y89226163.com 收集标本 7汤茜 1975-2-13女主治医师学士右江民族医学院 712836719163m0 收集标本 8陆小婶 1969-4-12女主管技师学士右江民族医学院 0776-284071yg9226163.com 实验测试 9何印蕾 1971-9-15女主管技师学士右江民族医学院 0776-2840 lyg9226@163.com 实验测试 总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 说明:1.高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报,总人数自动生成。 2.项目组主要成员不包括项目申请者
国家自然科学基金申请书 第 3 页 版本 1.014.348 项目组主要成员(杰出青年科学基金不填此栏) 编号 姓 名 出生年月 性别 职 称 学 位 单位名称 电话 电子邮件 项目分工 每年工 作时间 （月） 1 黄瑞雅 1951-11-25 男 教授 学士 右江民族医学院 0776-28488 02 lyg9226@163.com 参与课题设 计实验测试 8 2 张建江 1972-10-13 男 博士生 学士 中南大学 0731-55242 22-2261 csuxyyzw@hotmail.com 收集标本与 实验测试 8 3 林娜 1969-12-12 女 主治医师 硕士 右江民族医学院 0776-28367 45 lyg9226@163.com 收集标本 8 4 耿文茂 1978-10-30 男 硕士生 学士 中南大学 0731-55242 22-2261 csuxyyzw@hotmail.com 收集标本与 实验测试 8 5 陈霞静 1966-10-8 女 主治医师 学士 右江民族医学院 0776-28367 45 lyg9226@163.com 收集标本 7 6 黄月艳 1970-2-26 女 主治医师 硕士 右江民族医学院 0776-28367 45 lyg9226@163.com 收集标本 7 7 汤茜 1975-2-13 女 主治医师 学士 右江民族医学院 0776-28367 45 lyg9226@163.com 收集标本 7 8 陆小婵 1969-4-12 女 主管技师 学士 右江民族医学院 0776-28407 03 lyg9226@163.com 实验测试 7 9 何印蕾 1971-9-15 女 主管技师 学士 右江民族医学院 0776-28407 03 lyg9226@163.com 实验测试 7 总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 11 2 6 1 1 1 说明: 1. 高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报，总人数自动生成。 说明: 2. 项目组主要成员不包括项目申请者
国家自然科学基金申请书 经费申请表 (金额单位:万元) 科目 申请经费 备注(计算依据与说明) 研究经费 23.5000 1.科研业务费 4.5000 (1)测试/计算/分析费 1.5000大型仪器使用费 (2)能源/动力费 (3)会议费/差旅费 2500于出席学术交流会 (4)出版物/文献/信息传播费 0.5000论文发表 (5)其它 2.实验材料费 16.0000 (1)原材料/试剂/药品购置费 14.500购试剂盒、基因芯片,RNM提取 (2)其它 1.5000正常儿童标本采集费 3.仪器设备费 0.0000 (1)购置 0.0000 (2)试制 4.实验室改装费 0.0000 5.协作费 3.0000科研合作相关费用 因际合作与交流费 0.0000 1.项目组成员出国合作交流 2.境外专家来华合作交流 劳务费 1.0000科研劳务补贴费 四.管理费 1.0000科研管理费 合计 25.5000 国家其他计划资助经费 与本项目相关的 其他经费资助(含部门匹配) 其他经费来源 其他经费来源合计 0.0000 版本1014348
国家自然科学基金申请书 第 4 页 版本 1.014.348 经费申请表 （金额单位：万元） 科目 申请经费 备注（计算依据与说明） 一.研究经费 23.5000 1.科研业务费 4.5000 （1）测试/计算/分析费 1.5000 大型仪器使用费 （2）能源/动力费 （3）会议费/差旅费 2.5000 用于出席学术交流会 （4）出版物/文献/信息传播费 0.5000 论文发表 （5）其它 2.实验材料费 16.0000 （1）原材料/试剂/药品购置费 14.5000 购试剂盒、基因芯片，RNA 提取 （2）其它 1.5000 正常儿童标本采集费 3.仪器设备费 0.0000 （1）购置 0.0000 （2）试制 4.实验室改装费 0.0000 5.协作费 3.0000 科研合作相关费用 二.国际合作与交流费 0.0000 1.项目组成员出国合作交流 2.境外专家来华合作交流 三.劳务费 1.0000 科研劳务补贴费 四.管理费 1.0000 科研管理费 合 计 25.5000 与本项目相关的 其他经费来源 国家其他计划资助经费 其他经费资助（含部门匹配） 其他经费来源合计 0.0000
国家自然科学基金申请书 杳看报告正文撰写提纲 报告正文 (一)立项依据与研究内容(4000-8000字): 1.项目的立项依据(研究意义、国内外研究现状及分析,附主要参考文献目录。) 原发性肾病综合征( Primary Nephrotic Syndrome,PNS)是一组以大量蛋白尿、低蛋白血症、 高脂血症及不同程度的水肿为特征的临床症候群,是小儿最常见的泌尿系统疾病之一,国外有资料 报告,16岁以下人口中每年有2-7/10万新病例发生,1968年 Schlesinger自美国报告16岁以下人 口中PN年发生率为2/10万,累积结果为每10万小儿中有15.7例或相当于每6000小儿中有1名 患者,我国尚缺乏类似报告。 PS的病因和发病机制尚不清楚,使其治疗缺乏特异性和明确的方向。近年来,随着人类基因 组计划的进行,人们越来越多地认识到PNS的发生发展及治疗反应和预后与遗传背景相关,PNS的 发生涉及一个以上的基因以及基因与环境因素的相互作用,肾脏致病基因的研究已成为当今的热 点,筛选PNS的发生发展中起关键作用的基因,并给予特异性干预,对于治疗PNS具有重要意义 肾脏在不同的生理条件下都有多个基因表达,这些基因作为一个统一的整体进行调节,各基因 在细胞分化、个体发育过程中保持高度时间、空间、表达量的协调性,并可能按照一定的时间顺序 组成基因表达通路或基因调节网络,在这条通路或网络上可能有一条或数条起关键作用的基因,利 用基因芯片高通量、平行分析的优点可以帮助我们绘制肾脏相关基因作用通路或网图,并可进一步 分析病理条件下此通路或网图的变化及其中几个起关键作用的异常基因,而其他基因的异常表达是 继发于关键基因的异常表达,这有助于从基因水平揭示疾病的发生本质。 在PNS研究较多的是人类的白细胞抗原(HA)基因,由于不同人种间HA抗原分布有差异,有 些抗原具有人种特异性,因此与PNS有关的HA基因在不同人种检出情况不同。利用PCR和特异性 的寡核苷酸方法研究表明,上海地区小儿激素敏感型PNS与HA-DRB107明显相关,而HA-DRB1 09与该病的频复发相关,日本小儿激素敏感型PNS与 HLA-DQB1“0302明显相关,而0QA10103等位 基因频率明显下降,埃及小儿激素敏感型PN与HA-DQB1*0601和DRB101明显相关,法国和德 国则与HLA-DQA10201和DQB10201明显相关,而DQA10102和DQB10602等位基因频率明显下降, 而且频复发患儿与之相关性较非频复发、无复发患儿更明显。提示不同地区PN儿童对激素效应 存在基因表达的差异 血管紧张素转换酶(ACE)在肾脏疾病的发生发展中占有重要地位。血管紧张素Ⅱ被认为是肾内 的生长激素,它参与调节肾小球内血液动力学的变化,同时还可引起肾小球系膜细胞的增生和细胞 外基质的增多,这些均是导致肾小球硬化的关键因素。血管紧张素Ⅱ主要是由血管紧张素I在ACE 作用下生成。ACE在血中水平较为稳定,甚至认为与环境、代谢、激素水平及年龄无关,但却存在 个体间差异,体内50%的ACE水平变化取决于ACE基因插入(I)/缺失(D)多态性的调控,ACE基 因位于17q23,由26个外显子和25个内含子组成,ACE基因依据第16号内含子内-287碱基对的缺 失或插入而在人群中表现为D型、DI型和Ⅱ型的遗传多态性。DD型者血循环ACE水平最高,血管 紧张素Ⅱ生成最多,D型次之,而Ⅱ型者水平最低。Lee等对PNS不同病理类型患者ACE基因I/D 多态性的研究表明,微小病变组各基因型分布与正常对照组无明显差异,而局灶性节段性肾小球硬 化组D型频率显著高于微小病变组和正常对照组,而Ⅱ型频率显著降低,并且在局灶性节段性肾小 球硬化组中,DD型与DI型和Ⅱ型相比,起病年龄小,对糖皮质激素疗效差,慢性肾功能不全发生 率高。 血小板活化因子(PAF)由炎症细胞、内皮细胞和肾小球系膜细胞产生,具有广泛的生物学活性, 第5页 版本1014348
国家自然科学基金申请书 第 5 页 版本 1.014.348 查看报告正文撰写提纲 报告正文 （一）立项依据与研究内容（4000-8000 字）： 1. 项目的立项依据（研究意义、国内外研究现状及分析，附主要参考文献目录。） 原发性肾病综合征（Primary Nephrotic Syndrome , PNS）是一组以大量蛋白尿、低蛋白血症、 高脂血症及不同程度的水肿为特征的临床症候群，是小儿最常见的泌尿系统疾病之一，国外有资料 报告，16 岁以下人口中每年有 2-7/10 万新病例发生，1968 年 Sohlesinger 自美国报告 16 岁以下人 口中 PNS 年发生率为 2/10 万，累积结果为每 10 万小儿中有 15.7 例或相当于每 6000 小儿中有 1 名 患者，我国尚缺乏类似报告 [1]。 PNS 的病因和发病机制尚不清楚，使其治疗缺乏特异性和明确的方向。近年来，随着人类基因 组计划的进行，人们越来越多地认识到 PNS 的发生发展及治疗反应和预后与遗传背景相关，PNS 的 发生涉及一个以上的基因以及基因与环境因素的相互作用 [2，3]，肾脏致病基因的研究已成为当今的热 点 [4]，筛选 PNS 的发生发展中起关键作用的基因，并给予特异性干预，对于治疗 PNS 具有重要意义。 肾脏在不同的生理条件下都有多个基因表达，这些基因作为一个统一的整体进行调节，各基因 在细胞分化、个体发育过程中保持高度时间、空间、表达量的协调性，并可能按照一定的时间顺序 组成基因表达通路或基因调节网络，在这条通路或网络上可能有一条或数条起关键作用的基因，利 用基因芯片高通量、平行分析的优点可以帮助我们绘制肾脏相关基因作用通路或网图，并可进一步 分析病理条件下此通路或网图的变化及其中几个起关键作用的异常基因，而其他基因的异常表达是 继发于关键基因的异常表达，这有助于从基因水平揭示疾病的发生本质。 在 PNS 研究较多的是人类的白细胞抗原（HLA）基因，由于不同人种间 HLA 抗原分布有差异，有 些抗原具有人种特异性，因此与 PNS 有关的 HLA 基因在不同人种检出情况不同。利用 PCR 和特异性 的寡核苷酸方法研究表明，上海地区小儿激素敏感型 PNS 与 HLA-DRB1※ 07 明显相关，而 HLA-DRB1※ 09 与该病的频复发相关，日本小儿激素敏感型 PNS 与 HLA-DQB1※ 0302 明显相关，而 OQA1※ 0103 等位 基因频率明显下降 [5]，埃及小儿激素敏感型 PNS 与 HLA-DQB1※ 0601 和 DRB1※ 01 明显相关 [6]，法国和德 国则与 HLA-DQA1※ 0201 和 DQB1※ 0201 明显相关，而 DQA1※ 0102 和 DQB1※ 0602 等位基因频率明显下降， 而且频复发患儿与之相关性较非频复发、无复发患儿更明显 [7]。提示不同地区 PNS 儿童对激素效应 存在基因表达的差异。 血管紧张素转换酶（ACE）在肾脏疾病的发生发展中占有重要地位。血管紧张素Ⅱ被认为是肾内 的生长激素，它参与调节肾小球内血液动力学的变化，同时还可引起肾小球系膜细胞的增生和细胞 外基质的增多，这些均是导致肾小球硬化的关键因素。血管紧张素Ⅱ主要是由血管紧张素Ⅰ在 ACE 作用下生成。ACE 在血中水平较为稳定，甚至认为与环境、代谢、激素水平及年龄无关，但却存在 个体间差异，体内 50%的 ACE 水平变化取决于 ACE 基因插入（I）/缺失（D）多态性的调控，ACE 基 因位于 17q23，由 26 个外显子和 25 个内含子组成，ACE 基因依据第 16 号内含子内-287 碱基对的缺 失或插入而在人群中表现为 DD 型、DI 型和Ⅱ型的遗传多态性。DD 型者血循环 ACE 水平最高，血管 紧张素Ⅱ生成最多，DI 型次之，而Ⅱ型者水平最低。Lee 等 [8]对 PNS 不同病理类型患者 ACE 基因 I/D 多态性的研究表明，微小病变组各基因型分布与正常对照组无明显差异，而局灶性节段性肾小球硬 化组 DD 型频率显著高于微小病变组和正常对照组，而Ⅱ型频率显著降低，并且在局灶性节段性肾小 球硬化组中，DD 型与 DI 型和Ⅱ型相比，起病年龄小，对糖皮质激素疗效差，慢性肾功能不全发生 率高。 血小板活化因子（PAF）由炎症细胞、内皮细胞和肾小球系膜细胞产生，具有广泛的生物学活性