检查保护 国家自然科学基金 申请书 申报日期 2004年2月16日 国家自然科学基金委员会
申请代码： 受理部门： 收件日期： 受理编号： 检查保护 国家自然科学基金 申 请 书 资助类别： 亚类说明： 附注说明： 项目名称： 申 请 者： 电话： 依托单位： 通讯地址： 邮政编码： 单位电话： 电子邮件： 申报日期： 2004年2月16日 国家自然科学基金委员会 您现在不能检查保护文档或打印文档，请根据以下三个步骤操作： 1)如果您是 Word2000 或以上版本用户，请把 Word 宏的安全性设为:"中" 方法: Word 菜单->工具->宏->安全性->安全级,设置为"中" (如果您是 Word97 用户，继续执行以下步骤) 2)关闭本文档，重新打开本文档 3)点击"启用宏"按钮，即可开始填写本文档或打印了
国家自然科学基金申请 基本信息 名/王文君 性别女年月94年7月民族汉族 姓学电传 位|硕士 职称副教授 主要研究领域|中西医结合妇科 请 话021-63787331 电子邮件dili@shmu.edu.cn 者 真|021-63787331 信 个人网页 息工作单位复旦大学/妇产科医院 在研项目批准号 名称复旦大学 代码20043301 莅联系人唐郁 电子邮件jihua@fudan.edu.cn 信 话021-65643671 网站地址|w. fudan.edu.cn 单位名称 代码 单[在此录入修改 [在此录入修改] 项目名称 补肾宁心方通过ER非经典途径介导对绝经后骨质疏松的防治作用 项「资助类别面上项目 亚类说明自由申请项目 附注说明 基 本床基础研究 C0305002:中西医结合临c0305031:中医老年病学 信基地类别 息预计研究年限2005年1月-2007年12月研究属性|应用基础研究 项目研究内容和意义简介(限400字) 用临床疗效确切的补肾宁心方灌服绝经后骨质疏松小鼠模型,分析外周免疫活性细胞 摘|11/D2型细胞因子的表达,内分泌(B2,0和骨生化指标的变化,观察药物对骨及子宫 内膜芳香化酶活性的影响,比较药物对成骨细胞(OB)生物学功能及子宫内膜作用的差异 体外培养0B,模拟雌激素衰退,分析OB优势表达的雌激素受体(ER)亚型,及药物血清对 骨吸收抑制因子(0PG)和优势ER亚型(α或β)的调节作用。根据体内、外研究结果, RNAi技术建立优势ER亚型沉默表达的成骨细胞及内膜癌细胞系,分析其pERK1/2的表达及 要细胞的增殖与调亡,解析ER亚型介导的信号途径及其对靶细胞的影响。阐明该复方防治绝 经后骨质疏松,而对生殖系统无雌激素样副作用的机理。该研究还将有助于寻找药物归经 的物质基础,深化中医药的药物归经理论 关键词(用分号分开,最多5个)绝经后骨质疏松:补肾宁心方;雌激素受体:RNAi;选择性作用 第2页 版本1.018.551
国家自然科学基金申请书 第 2 页 版本 1.018.551 基本信息 7IeOqrU/ 姓 名 王文君 性别 女 出生 年月 1964 年 7 月 民 族 汉族 学 位 硕士 职称 副教授 主要研究领域 中西医结合妇科 电 话 021-63787331 电子邮件 djli@shmu.edu.cn 传 真 021-63787331 个 人 网 页 工 作 单 位 复旦大学 /妇产科医院 申 请 者 信 息 在研项目批准号 名 称 复旦大学 代 码 20043301 联 系 人 唐郁 电子邮件 jihua@fudan.edu.cn 依托单位信息 电 话 021-65643671 网站地址 www.fudan.edu.cn 单 位 名 称 代 码 [在此录入修改] 合作单位信息 [在此录入修改] 项目名称 补肾宁心方通过ER非经典途径介导对绝经后骨质疏松的防治作用 资助类别 面上项目 亚类说明 自由申请项目 附注说明 申请代码 C03050402:中西医结合临 床基础研究 C03050311:中医老年病学 基地类别 预计研究年限 2005 年 1 月 — 2007 年 12 月 研究属性 应用基础研究 项 目 基 本 信 息 摘 要 项目研究内容和意义简介（限 400 字）： 用临床疗效确切的补肾宁心方灌服绝经后骨质疏松小鼠模型，分析外周免疫活性细胞 Th1/Th2 型细胞因子的表达、内分泌(E2、DHEA)和骨生化指标的变化，观察药物对骨及子宫 内膜芳香化酶活性的影响，比较药物对成骨细胞(OB)生物学功能及子宫内膜作用的差异。 体外培养 OB，模拟雌激素衰退，分析 OB 优势表达的雌激素受体（ER）亚型，及药物血清对 骨吸收抑制因子（OPG）和优势 ER 亚型（α或β）的调节作用。根据体内、外研究结果， RNAi 技术建立优势 ER 亚型沉默表达的成骨细胞及内膜癌细胞系，分析其 pERK1/2 的表达及 细胞的增殖与凋亡，解析 ER 亚型介导的信号途径及其对靶细胞的影响。阐明该复方防治绝 经后骨质疏松，而对生殖系统无雌激素样副作用的机理。该研究还将有助于寻找药物归经 的物质基础，深化中医药的药物归经理论。 关 键 词(用分号分开，最多 5 个) 绝经后骨质疏松；补肾宁心方；雌激素受体；RNAi；选择性作用
国家自然科学基金申讠 项目组主要成员(杰出青年科学基金不填此栏) 编号姓名 出生年月性别职称学位 单位名称 电话 电子邮件 项目分工作时间 (月) 1钱来 1952-46女|副教授学士复旦大学 021-637873 djligshmu. edu. cn 实验设计 实验及总结 俞瑾 1935106女|教授学士复旦大学 021-6378731djlieshmu. edu.cn 参与课题设5 计及监督 3 王玉东 1974-4-17男|博士生博士复旦大学 021-637813djlieshmu.edu.cn 生物学功能10 郝群 1973-4-13女博士生博士复旦大学 02:6873li@shu.cdu.cn|实验 分子生物学10 5/朱影 1956714女|技师其他复旦大学 03+3701| djlieshmu. edu. cn|免疫学技术5 1975-7-30男|技师 其他复旦大学 021-637701djligshmu. edu.cn 61286 动物实验 6 在此录入修改] 8|在此录入修改 9|【在此录入修改 总人数 高级 中级 博士后 博士生 硕士生 说明:1.高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报,总人数自动生成。 2.项目组主要成员不包括项目申请者 版本1018551
国家自然科学基金申请书 第 3 页 版本 1.018.551 项目组主要成员(杰出青年科学基金不填此栏) 编号 姓 名 出生年月 性别 职 称 学 位 单位名称 电话 电子邮件 项目分工 每年工 作时间 （月） 1 钱来娣 1952-4-6 女 副教授 学士 复旦大学 021-637873 31 djli@shmu.edu.cn 实验设计、 实验及总结 8 2 俞瑾 1935-10-6 女 教授 学士 复旦大学 021-637873 31 djli@shmu.edu.cn 参与课题设 计及监督 5 3 王玉东 1974-4-17 男 博士生 博士 复旦大学 021-637873 31 djli@shmu.edu.cn 生物学功能 10 4 郝群 1973-4-13 女 博士生 博士 复旦大学 021-637873 31 djli@shmu.cdu.cn 分子生物学 实验 10 5 朱影 1956-7-14 女 技师 其他 复旦大学 021-637701 618＊286 djli@shmu.edu.cn 免疫学技术 5 6 孟毅 1975-7-30 男 技师 其他 复旦大学 021-637701 61＊286 djli@shmu.edu.cn 动物实验 6 7 [在此录入修改] 8 [在此录入修改] 9 [在此录入修改] 总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 7 3 0 2 0 2 说明: 1. 高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报，总人数自动生成。 说明: 2. 项目组主要成员不包括项目申请者
国家自然科学基金申请书 经费申请表 (金额单位:万元) 科目 申请经费 备注(计算依据与说明) 研究经费 6000 1.科研业务费 4.5000 (1)测试/计算/分析费 1.000物模型的建立,骨生化指标测定等 (2)能源/动力费 1.0000水电煤气、液氮的维持等 (3)会议费/差旅费 0.5000学术会议、参加学习班等 (4)出版物/文献/信息传播费 1.000查新、发表文章、论文编写、成果鉴定等 (5)其它 1.000购买相关分子生物学软件等 2.实验材料费 12.6000 (1)原材料/试剂/药品购置费 020细胞培养,分子生物学实验、流式高效液相试剂 及 (2)其它 2.4000 购买动物、饲喂、手术等,培养瓶/板等一次性物 3.仪器设备费 1.0000 (1)购置 1.0000实验仪器的保养和维护 (2)试制 0.0000 4.实验室改装费 0.0000 5.协作费 1.5000中药提制、未脱钙骨的冰冻切片 国际合作与交流费 0000 1.项目组成员出国合作交流 2.0000 2.境外专家来华合作交流 1.0000 三.劳务费 1.0000博士后及研究生津贴 四管理费 0.5000 合计 24.1000 国家其他计划资助经费 与本项目相关的 其他经费来源 其他经费资助(含部门匹配) 其他经费来源合计 0.0000 版本1.018.551
国家自然科学基金申请书 第 4 页 版本 1.018.551 经费申请表 （金额单位：万元） 科目 申请经费 备注（计算依据与说明） 一.研究经费 19.6000 1.科研业务费 4.5000 （1）测试/计算/分析费 1.0000 动物模型的建立，骨生化指标测定等。 （2）能源/动力费 1.0000 水电煤气、液氮的维持等 （3）会议费/差旅费 0.5000 学术会议、参加学习班等 （4）出版物/文献/信息传播费 1.0000 查新、发表文章、论文编写、成果鉴定等 （5）其它 1.0000 购买相关分子生物学软件等 2.实验材料费 12.6000 （1）原材料/试剂/药品购置费 10.2000 细胞培养、分子生物学实验、流式/高效液相试剂、 激素、细胞因子及其测定试剂盒 （2）其它 2.4000 购买动物、饲喂、手术等，培养瓶/板等一次性物 品 3.仪器设备费 1.0000 （1）购置 1.0000 实验仪器的保养和维护 （2）试制 0.0000 4.实验室改装费 0.0000 5.协作费 1.5000 中药提制、未脱钙骨的冰冻切片 二.国际合作与交流费 3.0000 1.项目组成员出国合作交流 2.0000 2.境外专家来华合作交流 1.0000 三.劳务费 1.0000 博士后及研究生津贴 四.管理费 0.5000 合 计 24.1000 国家其他计划资助经费 其他经费资助（含部门匹配） 与本项目相关的 其他经费来源 其他经费来源合计 0.0000
国家自然科学基金申请书 查看报告正文撰写提纲」 报告正文 (一)立项依据与研究内容(4000-8000字 项目的立项依据(附主要的参考文献目录 【项目的研究意义】 绝经后骨质疏松症( postmenopausal osteoporosis,PMO)及其所致的骨折是全球性老年人病死 率和医疗费升高的主要原因;随着世界人口的老龄化,PMO将成为前所未有的公共卫生问题。我 们据《素问·上古天真论》“女子七七肾气衰,…任脉虚,太冲脉衰少”而组方的补肾宁心方(曾用 名更年健/青/春),具有补肾宁心,燮理阴阳的功能。不仅能有效地改善围绝经期妇女的精神和神经 症状,同时对绝经后骨质疏松有良好的防治作用23。围绝经期妇女在口服“更年春”后外周血E2 水平无明显变化,Th细胞比例显著增加,IL-2诱生水平明显升高。另外,“更年春”能增强老年 雌性大鼠脾细胞雌激素受体(ER)的表达,从而增强雌激素对免疫细胞的生物效应,改善衰老机体的 免疫功能。 在成骨细胞(OB)和破骨细胞(0C)维持的骨代谢平衡中,0B起着非常重要的作用,而目前应用 的经典抗骨质疏松药物(降钙素、二磷酸盐、雌激素等),多为抑制C活性的药物,缺乏刺激OB活 性或既刺激OB又抑制OC的药物。因此,应该在深入研究和发掘化学合成药物的同时,更应注重天 然植物化合物的开发应用。在补肾宁心方改善围绝经期症状及对骨质疏松良好疗效的基础上,进 一步探讨其对绝经后骨质疏松的疗效机制具有重要的意义。 【立项依据及国内外研究现状】 近来美国妇女健康协会( Wommen' s Health Initiative,wHI)临床研究发现,激素替代治疗(HRT) 虽然降低了骨质疏松和骨折的危险性;但增加了乳腺癌、子宫内膜癌以及心血管疾患、中风的发病 率。总体权衡HRT的利弊显示,对妇女健康的风险超过了受益。大量的临床和实验研究证明, 以补肾为主的“更年春”复方对更年期综合征具有良好效果,实验证明老年大鼠灌服“更年春”后 虽然其血雌激素浓度不增高,但其下丘脑、垂体、卵巢、脾脏雌激素受体(ER)含量增加‘*5。实 验还证实,“更年春”对实验性原发性骨质疏松有防治作用23,并初步证实补肾宁心方对OB的增 殖作用。因而进一步探讨ER介导补肾宁心方对PMO的疗效机制具有重要的现实意义。 有研究认为,雌激素替代治疗(ERT)既无刺激骨早期合成的效应,也无抑制骨吸收的效应 值得注意的是:一些低雌激素(E)水平的妇女并不发生骨质疏松。另外,在E-ER效应机制中,雌 激素受体比雌激素扮演着更为重要的角色。目前认为,ERa和ERβ(1996年新克隆的受体)两种 第5页 版本1.018.551
国家自然科学基金申请书 第 5 页 版本 1.018.551 查看报告正文撰写提纲 报告正文 （一）立项依据与研究内容（4000-8000 字）： 1、 项目的立项依据（附主要的参考文献目录）。 【项目的研究意义】 绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis, PMO)及其所致的骨折是全球性老年人病死 率和医疗费升高的主要原因；随着世界人口的老龄化，PMO 将成为前所未有的公共卫生问题（1）。我 们据《素问·上古天真论》“女子七七肾气衰，…任脉虚，太冲脉衰少”而组方的补肾宁心方（曾用 名更年健/青/春），具有补肾宁心，燮理阴阳的功能。不仅能有效地改善围绝经期妇女的精神和神经 症状，同时对绝经后骨质疏松有良好的防治作用（2、3）。围绝经期妇女在口服“更年春”后外周血 E2 水平无明显变化，Th 细胞比例显著增加，IL-2 诱生水平明显升高（4）。另外，“更年春”能增强老年 雌性大鼠脾细胞雌激素受体（ER）的表达,从而增强雌激素对免疫细胞的生物效应，改善衰老机体的 免疫功能（5） 。 在成骨细胞（OB）和破骨细胞(OC)维持的骨代谢平衡中，OB 起着非常重要的作用，而目前应用 的经典抗骨质疏松药物（降钙素、二磷酸盐、雌激素等），多为抑制 OC 活性的药物，缺乏刺激 OB 活 性或既刺激 OB 又抑制 OC 的药物。因此，应该在深入研究和发掘化学合成药物的同时，更应注重天 然植物化合物的开发应用（6）。在补肾宁心方改善围绝经期症状及对骨质疏松良好疗效的基础上，进 一步探讨其对绝经后骨质疏松的疗效机制具有重要的意义。 【立项依据及国内外研究现状】 近来美国妇女健康协会（Wommen’s Health lnitiative,WHI）临床研究发现，激素替代治疗（HRT） 虽然降低了骨质疏松和骨折的危险性；但增加了乳腺癌、子宫内膜癌以及心血管疾患、中风的发病 率（7）。总体权衡 HRT 的利弊显示，对妇女健康的风险超过了受益。大量的临床和实验研究证明， 以补肾为主的“更年春”复方对更年期综合征具有良好效果，实验证明老年大鼠灌服“更年春”后 虽然其血雌激素浓度不增高，但其下丘脑、垂体、卵巢、脾脏雌激素受体（ER）含量增加（4，5） 。实 验还证实，“更年春”对实验性原发性骨质疏松有防治作用（2，3） ，并初步证实补肾宁心方对 OB 的增 殖作用（8） 。因而进一步探讨 ER 介导补肾宁心方对 PMO 的疗效机制具有重要的现实意义。 有研究认为，雌激素替代治疗（ERT）既无刺激骨早期合成的效应，也无抑制骨吸收的效应（9） 。 值得注意的是：一些低雌激素（E）水平的妇女并不发生骨质疏松。另外，在 E-ER 效应机制中，雌 激素受体比雌激素扮演着更为重要的角色。目前认为，ERα和 ERβ（1996 年新克隆的受体）两种