南京业火学动物生物化学实验000009·E实验五聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白动物医学院动物生化教研室
1 实验五 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白 动物医学院动物生化教研室 动物生物化学实验
一、实验目的D掌握聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的原理：2学习聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的操作技术：③了解血清蛋白的主要成份。C
2 ① 掌握聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的原理； ② 学习聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的操作技术； ③ 了解血清蛋白的主要成份。 一、实验目的
二、 实验原理》不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白样品通过浓缩胶的浓缩按分子大小排列成层，然后进入分离胶，随着电泳的不断进行，不同大小、电荷的蛋白质分子逐渐被分开
3 二、实验原理 不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白样品通过浓缩胶的浓 缩按分子大小排列成层，然后进入分离胶，随着电泳的不断进行 ，不同大小、电荷的蛋白质分子逐渐被分开
1、聚丙烯酰胺凝胶生成TEMED催化AP生成硫酸自由基催化Acr聚合成长链CONH,CONH,CONH,CONH,CONH,SO,+nCH,=CHCH,CH-CH,-CH-CH,-CHCH-CH（Acr单体长链）(Acr)Bis将单体长链连成网状结构Acr：丙烯酰胺CONH,CONHCONH,CHCH,-SHCHBis：甲叉双丙烯酰胺（Acr单体长链）AP：过硫酸胺（催化剂）CONHCONH,CHHCH.-CHHTEMED：N,N,N',N'-四甲基乙二胺(CONHCONH加速剂)CH:pHCONHCONHCONHCONHCH-CH,CH-CH,-CH-CH,-CHCH,Acr、Bis决定孔径大小CONHAP、TEMED决定聚合速度CCONH,CONHCONH,[CH,CH—CH,CHCH-CH,-CHOHCONHCONH三维两状极胶4
4 Bis将单体长链连成网状结构 TEMED催化AP生成硫酸自由基 1、聚丙烯酰胺凝胶生成 催化Acr聚合成长链 Acr：丙烯酰胺 Bis：甲叉双丙烯酰胺 AP：过硫酸胺（催化剂） TEMED： N, N, N′,N′-四甲基乙二胺（ 加速剂） Acr、Bis决定孔径大小 AP、TEMED决定聚合速度
2、连续胶和不连续胶电泳连续胶电泳采用相同孔径的凝胶和相同的缓冲系统（样品缓冲液、凝胶缓冲液和电极缓冲液），在pH恒定、离子强度相同的条件下进行。优点：美》制胶简单、快捷》缓冲液pH值恒定，可以防止样品进胶后因pH值改变发生的凝聚和沉淀》缓冲系统组成简单，来源广泛缺点：》分辨率不高
5 连续胶电泳 采用相同孔径的凝胶和相同的缓冲系统（样品缓冲液、凝胶缓冲液 和电极缓冲液），在pH恒定、离子强度相同的条件下进行。 优点： 制胶简单、快捷 缓冲液pH值恒定，可以防止样品进胶后因pH值改变发生的凝聚和沉淀 缓冲系统组成简单，来源广泛 缺点： 分辨率不高 2、连续胶和不连续胶电泳