三、凝胶层析技术概念:凝胶层析又称分子筛层析、排阻层析,当生物大分子随流动相通过装有作为固定相的凝胶颗粒的层析柱时,根据它们分子大小不同而进行分离的技术。原理:凝胶颗粒内部具有多孔性网状结构,被分离的混合物流过层析柱时,比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶孔内,在凝胶颗粒之间的空隙向下移动,并最先被洗脱出来;比网孔小的分子能不同程度的自由出入凝胶孔内外,在柱内经过的路程较长移动速度较慢,最后被洗脱出来
6 三、凝胶层析技术 概念:凝胶层析又称分子筛层析、排阻层析,当生物大分子随流动相通过装有作 为固定相的凝胶颗粒的层析柱时,根据它们分子大小不同而进行分离的技 术。 原理:凝胶颗粒内部具有多孔性网状结构,被分离的混合物流过层析柱时,比凝 胶孔径大的分子不能进入凝胶孔内,在凝胶颗粒之间的空隙向下移动,并 最先被洗脱出来;比网孔小的分子能不同程度的自由出入凝胶孔内外,在 柱内经过的路程较长移动速度较慢,最后被洗脱出来
小分子人分了洗脱上样洗脱多孔凝胶球888:8样品小分多孔凝胶球尼龙网或多孔板大分了TT收集收集收集凝胶过滤凝胶层析的原理分子大小不同混合物上柱:洗脱开始,小分子扩散进人凝胶颗粒内,大分子被排阻于颗粒之外;大小分子分开:大分子行程较短,已洗脱出层析柱,小分子尚在进行中
7 凝胶层析的原理 分子大小不同混合物上柱; 洗脱开始,小分子扩散进人凝胶颗粒内,大分子被排阻于颗粒之外; 大小分子分开: 大分子行程较短,已洗脱出层析柱,小分子尚在进行中
固定相:各种多孔凝胶,填充于层析柱中流动相:洗脱剂,缓冲液或蒸馏水凝胶过滤所用的介质是由交联葡聚糖、琼脂糖或聚丙烯酰胺形成的凝胶珠。凝胶珠的内部是多孔的网状结构。Sephadex-葡聚糖凝胶Sepharose-琼脂糖凝胶Sephacryl-丙烯酰胺葡聚糖凝胶
8 固定相: 各种多孔凝胶,填充于层析柱中 流动相: 洗脱剂,缓冲液或蒸馏水 凝胶过滤所用的介质是由交联葡聚糖、琼脂糖或聚丙烯酰胺形成的凝胶 珠。凝胶珠的内部是多孔的网状结构。 Sephadex-葡聚糖凝胶 Sepharose-琼脂糖凝胶 Sephacryl-丙烯酰胺葡聚糖凝胶