H,CCH3H,CCH3H,NCHCOOH+R40℃pH9.700=0HN-CHCOOHCIR5-二甲基蔡黄酰氯(DNS一C1)DNS一氨基酸>DNS-CI(丹磺酰氯)可代替DNFB>氨基酸的氨基与DNS-CI(丹磺酰氯)反应生成DNS-氨基酸>DNS-氨基酸有强烈荧光,可用荧光光度计检出;>此法用来鉴定多肽或蛋白质的N端氨基酸种类和数目。>灵敏度比DNFB法高100倍,比Edman法高几到十几倍
ØDNS-Cl (丹磺酰氯)可代替DNFB; Ø氨基酸的氨基与DNS-Cl (丹磺酰氯)反应生成DNS-氨基酸; ØDNS-氨基酸有强烈荧光,可用荧光光度计检出; Ø此法用来鉴定多肽或蛋白质的N端氨基酸种类和数目。 Ø灵敏度比DNFB法高100倍,比Edman法高几到十几倍
4)与异硫氰酸苯酯(PITC)反应(Edman反应)R>PITC与氨基酸的氨基反XCOOHHH应生成PTH-氨基酸PITC>PITC与多肽链N端氨基pH8.3酸的氨基反应生成PTHRH氨基酸和少一个氨基酸HNCOOHPTC-氨基酸H的多肽;>此法为Edman于20世纪50年代创立,称为无水HFEdman降解法,用于氨基酸序列测定PTH-氨基酸-HRH
(4) 与异硫氰酸苯酯(PITC)反应(Edman反应) ØPITC与氨基酸的氨基反 应生成PTH-氨基酸; ØPITC与多肽链N端氨基 酸的氨基反应生成PTH- 氨基酸和少一个氨基酸 的多肽; Ø此法为Edman于20世纪 5 0 年 代 创 立 , 称 为 Edman降解法,用于氨 基酸序列测定
(5)与荧光胺反应RNH2-N-CH-COOHHO+R-C-COOHH0荧光胺荧光产物>检测灵敏度:ng水平>激发波长:390nm,发射波长475nm>可以用荧光分光光度计进行定量检测
(5)与荧光胺反应 Ø 检测灵敏度:ng水平 Ø 激发波长:390nm,发射波长475nm Ø 可以用荧光分光光度计进行定量检测
(6)形成Schiff碱R0RH-C-NH3+R-C-HH-C-N=C-R'+HCOO-HCOO-H,OAminoacidSchiffbase>转氨基反应的中间步骤
(6) 形成Schiff碱 Ø 转氨基反应的中间步骤
(7)脱氨基反应RRRR转氨酶C=0C=0HC一NHHCNH++COOHCOOHCOOHCOOH氨基酸分解代谢的重要中间步骤
(7) 脱氨基反应 Ø 氨基酸分解代谢的重要中间步骤